杨树PeAFB基因克隆及表达模式初步分析
【目的】TIR1/AFB F-box作为生长素受体参与从生长素结合到 Aux/IAA蛋白降解这一信号转导过程。通过克隆杨树 AFB基因家族成员，并检测其在病原菌、激素和干旱胁迫下的表达模式，以期了解 AFB 基因在杨树生长发育及激素信号转导中的作用机制。【方法】以美洲黑杨杂种 NL-895杨为材料，通过 PCR 与 RACE 技术，克隆 NL-895杨 AFB基因家族成员全长 cDNA，进而利用在线分析软件和数据库对各成员编码蛋白质的理化参数、保守结构域、蛋白质三级结构进行分析和预测；根据氨基酸序列多重比对结果进行系统进化分析；采用实时定量PCR技术研究4个NL-895杨AFB基因家族成员在病原菌、激素和干旱胁迫下的表达模式。【结果】获得了4个 NL-895杨 AFB基因家族成员，分别命名为 PeAFB2-1，PeAFB2-2，PeAFB3和 PeAFB5，其全长 cDNA分别为2461，3115，2441，2818 bp，对应的 ORF分别为1546，1716，1716，1914 bp。4个 PeAFB蛋白亮氨酸含量均在10%以上，特别是 PeAFB2-1，高达13.4%，符合 AFB蛋白质富含亮氨酸特征。氨基酸序列分析结果表明，PeAFB家族成员均具有 F-box蛋白特征，其 N－端为典型的 F-box 结构域( IPR001810)，还含有5个富含亮氨酸重复序列(LRR-rich repeat，IPR006553)。4个杨树 AFB和其他模式植物 TIR1/AFB F-box 蛋白所构建系统发育树将47个 AFB蛋白家族成员聚为4大类，4个杨树 PeAFB蛋白属于第Ⅰ类，并且与拟南芥的 AtAFB 蛋白家族成员具有高度相似性。4个 PeAFB基因在茉莉酸甲酯(500μmol·L －1)、丁香假单胞菌 DC3000和 PEG(20%，m/V)等胁迫条件下，表达量均有不同程度的下调。【结论】本研究克隆了4个杨树 PeAFB家族成员，并揭示了其系统进化关系，基因表达分析表明4个 PeAFB基因在生物和非生物胁迫条件下，其表达量均有不同程度的下调，表明其可能参与了杨树对胁迫应答的负调控。
NL-895 杨、TIR1/AFB F-box蛋白、PeAFB、胁迫应答
S718.46(林业基础科学)
林业公益性行业科研专项;国家自然科学基金;江苏省基础研究计划自然科学研究面上项目;国家自然科学基金;江苏高校优势学科建设工程项目
2015-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
26-32
