松墨天牛ATP合成酶D亚基基因的鉴定与表达
【目的】研究松墨天牛 ATP合成酶 D亚基基因的鉴定及其表达特性，为开展昆虫 ATP 合成酶基因研究提供分子信息和参考，为深入研究 ATP合成酶基因在松墨天牛中的生理、毒理作用奠定基础。【方法】对从松墨天牛 cDNA文库中克隆的一条表达序列标签(EST)进行3'cDNA 末端快速扩增，将获得的扩增序列与 cDNA文库中的序列进行拼接，经开放阅读框( ORF)检索和 Blast同源比对鉴定基因；用 ProtParam tool软件分析基因编码的蛋白质性质，用 DNAMAN软件构建系统发育树，用实时荧光定量 PCR 分析基因在不同虫态、成虫各部位和幼虫组织中的表达特性。【结果】获得了1条长度为1133 bp的 cDNA，其5'端非编码区长89 bp，3'端非编码区长294 bp，ORF 长750 bp，编码 ATP 合成酶 D 亚基，命名为 MaATPSE ( GenBank 登录号：KM101044)。MaATPSE编码249个氨基酸残基，预测分子质量为28.21 kDa，等电点为9.40，稳定系数为31.13。MaATPSE 含有3个丝氨酸磷酸化位点、4个苏氨酸磷酸化位点、2个酪氨酸磷酸化位点和1个糖基化位点。松墨天牛与黑腹果蝇和家蚕的 MaATPSE相似性均为83%；松墨天牛与赤拟谷盗在系统发育树上聚成一支，相似性为87%，与其他非鞘翅目昆虫的遗传距离较远。MaATPSE在蛹和幼虫的相对表达量分别是成虫的3.70和2.65倍，各虫态之间表达有显著差异(P＜0.05)； MaATPSE在幼虫各组织中均有表达，在脂肪体中的表达量最高，为对照的5.94倍，其次是体壁和血淋巴，分别为对照的3.93和2.88倍；中肠和马氏管的表达量较低，分别为对照的0.24和0.28倍；除马氏管和中肠的相对表达量无显著差异外，各组织均有显著差异(P ＜0.05)。MaATPSE 在成虫头、腹、触角、足和翅的相对表达量分别为对照的2.24，3.09，3.52，3.39和4.45倍，胸部的表达量较低，为对照的0.68倍；成虫各部位之间相对表达量有显著差异( P＜0.05)。【结论】克隆到松墨天牛 ATP合成酶 D亚基基因MaATPSE，包括5'和3'非编码和完整的 ORF。MaATPSE 与赤拟谷盗 ATP 合成酶最为相似，MaATPSE 在松墨天牛幼虫、蛹和成虫中都有表达，在幼虫各组织和成虫各部位中广泛分布。
松墨天牛、ATP合成酶、基因表达、RT-qPCR、RACE
S763(森林保护学)
国家自然科学基金31170612
2015-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
60-68
