来源于解酯菌的嗜热耐碱脂肪酶的表达纯化及其酶学性质研究

摘要：

脂肪酶广泛应用于食品加工、生物柴油制备等领域.为了有效提高微生物脂肪酶的可利用度,将来源于解酯嗜热菌(Thermosyntropha lipolytica DSM 11003)的脂肪酶基因(tll2)克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中,获得重组质粒pET28a?TLL2,将pET28a?TLL2转入大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中进行高效表达.通过热处理和镍柱亲和层析得到电泳纯的蛋白TlLip2,对其进行酶学性质表征.结果显示,TlLip2的亚基分子质量为57 ku,比酶活为31 U/mg,最适反应pH及温度分别为8.0和60℃.在60℃以下、pH 6.0～11.0范围内,TlLip2的稳定性较好,相对酶活均维持在60％以上.金属离子K+和Na+对TlLip2有较大激活作用,而Co2+、Zn2+、SDS和Tween 80对TlLip2酶活力抑制作用明显.TlLip2在极性小的有机溶剂中具有较好的耐受性.TlLip2对中等碳链长度的对硝基苯酯显示出更高的活性,其中以对硝基苯己酯为底物时,TlLip2的酶活最高;以对硝基苯棕榈酸酯为底物时,该酶的动力学常数Km为0.29 mmol/L,Vmax为2.28 mmol/(L·min-1),kcat为6.19 s-1.此外,将其应用到油酸乙酯的合成研究中,以油酸和乙醇为底物,研究TlLip2催化制备油酸乙酯的转化条件,结果表明在60℃、加酶量为100 U/g的TlLip2,催化摩尔比为1:2的油酸和乙醇,12 h后油酸乙酯的转化率达到62.1％,表明TlLip2在催化脂肪酸酯化方面具有较大的应用潜能.

关键词：解酯菌、脂肪酶、酶学性质、油酸乙酯

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分类号：Q819(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金面上项目21878160

在线出版日期：2020-06-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：108-114