南极嗜冷杆菌脂肪酶的原核可溶性表达优化及酶学性能表征

摘要：

脂肪酶广泛应用于食品加工、生物柴油制备等领域。为了有效提高微生物脂肪酶的可利用度，将来源于南极嗜冷杆菌属（ antarctic psychrotrophic bacterium， Psychrobacter sp?7195）的嗜冷脂肪酶（ Lip7195）在大肠杆菌系统中进行高效可溶性表达优化，并进行酶学性能表征。首先对Lip7195基因进行大肠杆菌偏好密码子优化，并通过添加多聚阳离子氨基酸标签等手段，优化重组Lip7195的可溶性表达。结果显示，添加多聚阳离子氨基酸标签的方法有效增加了目的蛋白的可溶性。对纯化后的重组酶进行酶学定性，结果显示，在40℃、pH 9?0时，重组Lip7195酶活性最高，比酶活最高达10?9 U／mg；在30～40℃、pH 8?0～10?0范围，重组Lip7195具有较好的稳定性；Co2＋对酶活力有激活作用。研究结果表明，在保持嗜冷脂肪酶特有的酶学性质基础上，添加多聚阳离子氨基酸标签有效改善了其在原核表达中易形成包涵体的问题。

关键词：嗜冷脂肪酶、可溶性表达、多聚氨基酸标签、定点突变、酶学性质

所属期刊栏目：1

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家林业局“948”项目2014－4－37；国家自然科学基金项目31270612，31170537；江苏高校品牌专业建设工程项目 PPZY2015C22；江苏高校优势学科建设工程资助项目 PAPD。

在线出版日期：2016-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：71-77