润楠ISSR-PCR优化反应体系建立及引物筛选

摘要：

以润楠基因组总DNA为材料,利用单因素试验设计方法,对影响ISSR-PCR扩增的模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶以及去离子甲酰胺等试验因子进行了优化试验,筛选出16条有效引物并确定了它们的退火温度,并检测了体系的重复性.优化后的反应体系为:20 μL PCR反应体积中,10×PCR Buffer 2μL,2.0mmol/L Mg2+ 1.6 μL,0.2 mmol/L dNTPs 2 μL,0.4 mmol/L 引物0.8 μL,0.5U Taq DNA聚合酶0.1 μL,40 ng DNA模板1.0μL,1.5％去离子甲酰胺0.3 μL,ddH2O 12.2 μL.扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,据不同引物的退火温度复性45 s,72℃延伸90 s,反应37个循环,最后在72℃延伸7 min.润楠ISSR-PCR反应体系的建立为利用ISSR分子标记技术研究润楠的遗传多样性奠定了良好的基础.

关键词：润楠、ISSR、体系优化、引物筛选

所属期刊栏目：27

分类号：R44;S85

资助基金：林业公益性行业科研专项201004073;江西省财政林业重大科技专项"樟科树种种质基因库营建及产业化利用研究"2011510101

在线出版日期：2013-10-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：24-28