液相色谱法测定发酵液中阿魏酸酯酶的活力

摘要：

基于高效液相色谱法测定产物阿魏酸含量的方法,建立了阿魏酸酯酶酶活力的测定方法.实验采用ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,Agilent),以甲醇:1％ 乙酸=70:30作为流动相,等度洗脱(柱温35℃,流速1.0 ml/min,进样量10μl),在254 nm下测定阿魏酸含量.结果表明,该法测定酶反应产物阿魏酸含量的检测限为69.15μg/L,定量限为234.78μg/L,且在10～100 m g/L范围内呈良好的线性关系,R2=0.9999,重复性R S D小于1％,加标收回率为99.25％.在此基础上进一步确定阿魏酸酯酶酶活力测定时的酶反应终止液为30％ 的乙酸溶液.当阿魏酸生成量在15～25 m g/L时,酶反应处于动力学上的线性区.试验待测酶样的最适温度为55℃,最适pH5.0.经检验,该酶活力检测方法的精密度RSD小于3.0％,达到酶活力检测要求.

关键词：高效液相色谱法、阿魏酸酯酶、酶活、测定方法

分类号：O657.7(分析化学)

资助基金：山东省重大专项2019JZZY010814

在线出版日期：2022-07-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：54-58