和田羊FGF5基因RNA干扰载体构建及筛选

摘要：

试验旨在构建并筛选出高效的和田羊成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因的RNA干扰载体,根据和田羊FGF5基因序列,设计4条短发夹RNA(shRNA)干扰片段和1条阴性对照片段.扩增后克隆至pGPU6载体,获得 4 个重组质粒pGPU6-shRNA-FGF1、pGPU6-shRNA-FGF2、pGPU6-shRNA-FGF3、pGPU6-shRNA-FGF4和阴性对照质粒pGPU6-shRNA-FGF5.通过琼脂糖凝胶电泳和DNA测序对质粒进行酶切鉴定和测序鉴定.鉴定后的质粒通过电刺激法转染至和田羊成纤维细胞,通过qRT-PCR和Western Blotting(WB)分析FGF5基因的表达情况.结果显示,与阴性载体相比,4个RNA干扰表达载体均可显著降低FGF5 mRNA和蛋白的表达量(P<0.05),其中pGPU6-shRNA-FGF3干扰效率最高,为85.20%.研究表明,FGF5干扰表达载体构建成功并可有效干扰和田羊FGF5基因表达.

关键词：和田羊、RNA干扰、FGF5基因、载体构建、成纤维细胞

分类号：S813.1(普通畜牧学)

资助基金：新疆维吾尔自治区多浪羊品种选育推广技术体系专项;兵团重点领域科研攻关计划项目

在线出版日期：2023-10-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：32-36