山羊痘病毒晚转录因子VLTF-3基因的原核表达及结构预测
研究旨在了解羊痘病毒晚转录因子VLTF-3结构特征和生物学特征.试验采用PCR方法扩增羊痘病毒Thx毒株晚转录因子VLTF-3基因,将其插入质粒PET-42b中建立原核表达载体,经菌液PCR和测序方法鉴定.阳性质粒转入大肠杆菌BL21中,用0.1 mmoL/L的IPTG诱导其表达蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blot技术进行蛋白的表达的检测与鉴别.基因检测结果利用DNAMAN、DNAStar和Mega等软件进行生物信息学分析和建立遗传进化树,对其编码的氨基酸序列在线进行二级结构分析和高级结构的预测,并对其信号肽、跨膜特性、亲水性、磷酸化位点和抗原性等生物学特性进行分析.结果显示:试验成功扩增了 VLTF-3的基因组,并建立了原核表达载体pET-42b-VLTF-3.测序结果表明,GTPV-VLTF-3基因全长681 bp;与参照株GTPV-Pellor毒株的同源性达99％,保守性较强,编码227aa,与理论相符.遗传进化树分析结果显示,该基因与皮肤疙瘩病遗传距离最近.SDS-PAGE检测结果显示,该蛋白质大量表现在上清中;Western blot结果显示,该蛋白与His标签进行了融合表达.VLTF-3蛋白不具有信号肽,为非分泌型蛋白,共有22个磷酸化位点,α螺旋、无规则卷曲、延伸链和β转角分别占34.80％、35.68％、22.91％、6.61％,三级结构以α螺旋为主.研究表明,试验成功克隆了晚转录因子VLTF-3,并能够可溶性表达其蛋白,生物分析预测其高级结构α螺旋为主.
山羊痘病毒、克隆、融合表达、VLTF-3基因
S855(动物医学（兽医学）)
国家重点研发计划;国家自然科学基金;国家自然科学基金
2023-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
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