山羊伪结核棒状杆菌PMA-PCR检测方法的建立

摘要：

本试验旨在建立伪结核棒状杆菌的活菌检测方法,为临床检测及疫病防控提供理论依据.利用PMA可选择性穿透死菌细胞膜,在强光作用下与死菌DNA共价交联,阻止以其DNA为模板的PCR扩增这一原理,将PMA与PCR鉴定相结合,并对PMA最佳曝光时间、最适工作浓度进行优化,建立伪结核棒状杆菌PMA-PCR活菌检测方法,并对其特异性进行分析.结果表明最佳曝光时间为15 min,PMA能够完全抑制死菌PCR扩增的最低浓度为20 μmol/L,不抑制活菌PCR扩增的最大PMA浓度为30 μmol/L.特异性试验结果显示,仅伪结核棒状杆菌可扩增出目的条带,而在链球菌、多杀性巴氏杆菌中未扩增出目的条带.对不同比例的死/活菌检测发现,该方法可以有效针对活菌进行检测,活菌的最低检测浓度为1×104cfu/mL.本研究为伪结核棒状杆菌的活菌检测提供了一定的理论依据,也为由伪结核棒状杆菌诱发的山羊疫病防控奠定了基础.

关键词：伪结核棒状杆菌、PMA、PCR、活细菌检测、共价交联

分类号：S858.27(动物医学（兽医学）)

资助基金：武隆区科技计划资助项目[2017]11号;重庆市现代山地特色高效农业技术体系资助项目[2018]3号

在线出版日期：2019-02-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：9-13