猪圆环病毒2型纳米PCR检测方法的建立及初步应用

摘要：

建立一种高效、快捷、灵敏的猪圆环病毒2型(PCV-2)的检测方法,本研究根据PCV-2ORF2基因的保守核苷酸区域设计一对特异性引物,建立了一种用于检测PCV-2的纳米PCR方法,对其反应条件进行优化,并用重组质粒PET28a-ORF2,以及PCV-2(DNA)、猪流行性腹泻病毒(cDNA)、猪瘟病毒(cDNA)和猪细小病毒(cD-NA)分别作为模板,检测了该方法的灵敏性及特异性,同时对采集的临床样品进行检测.结果表明,该纳米PCR方法可以扩增出大小为636 bp的特异性片段;最佳的退火温度为54℃,胶体金浓度为0.5 nmol/L,最低可以检出1.0×102拷贝/L,其灵敏度比普通PCR检测方法高10倍以上;对采集的新疆某大型种猪场的78临床份病料进行检测,其阳性检出数量比常规PCR的检出数量高4份样品,表明PCV-2纳米PCR方法具有较高的特异性和灵敏性.本研究建立的纳米PCR方法可用于PCV-2病原学的早期检测和分子流行病学调查;同时对于低病毒的临床样品的检测也提供了一种有效的技术手段.

关键词：猪圆环病毒2型、ORF2基因、纳米PCR、临床样品、病原学检测

分类号：S852.651(动物医学（兽医学）)

资助基金：西部地区高发人兽共患传染性疾病防治项目2013-179

在线出版日期：2018-01-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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