小干扰RNA逆转Wnt/β-catenin通路对肝癌耐药细胞株HepG2/ADM的影响研究

摘要：

目的 了解沉默β-catenin基因对肝癌耐药细胞HepG2的影响.方法 实验分为5组:正常肝细胞(LO2)组、HepG2组、HepG2/ADM组、SiNC-HepG2/ADM阴性转染组和Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组;细胞免疫荧光技术检测各组β-catenin的表达情况;设计并筛选出抑制效率最高的Siβ-catenin;Western-blot及RT-PCR技术检测各组β-catenin、P-gp、MRP1的mRNA和蛋白的表达水平;MTT法观察各组对阿霉素(ADM)、氟尿嘧啶(5-FU)、环磷腺苷(VCR)和奥沙利铂(OHP)的敏感性;流式细胞仪检测各组细胞凋亡.结果 50 mol/L的ctnnb1-001在HepG2/ADM 中抑制效率最高:78.86％ (P＜0.05),选其为Si-β-catenin;细胞免疫荧光显示HepG2/ADM中β-catenin荧光最强,转染Si-β-catenin后荧光显著减弱;β-catenin、P-gp和MRP1 mRNA和蛋白在HepG2/ADM组表达较高,mRNA表达分别为:0.92±0.03、7.98±0.43和4.56±0.12 (P＜0.05),蛋白表达分别为:1.128±0.214、1.678±0.344和1.405±0.212 (P＜0.05);转染Siβ-catenin至HepG2/ADM中,β-catenin、P-gp和MRP1在mRNA及蛋白水平均不同程度表达减少,mRNA表达分别为:0.47±0.03、0.66±0.054和0.74±0.03 (P＜0.05),蛋白表达分别为:0.787±0.032、0.797±0.055和1.390±0.050 (P＜0.05);Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组较HepG2/ADM组对ADM、5-FU、VCR和OHP的耐药系数(RI)分别为0.61、0.55、0.30、0.55,对化疗药物敏感性显著增强(P＜0.05);Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组凋亡率(28.05±0.35)％,较其他组明显增加(P＜0.05).结论 Wnt/β-catenin通路在HepG2中异常激活,其中β-catenin可能正性调控肝癌耐药基因P-gp和MRP1,Si-β-catenin能一定程度阻断Wnt通路,并能一定程度逆转肝癌细胞株HepG2的耐药性和增强化疗敏感性,增加凋亡.

关键词：肝癌、多药耐药、β-catenin、小干扰RNA、HepG2

所属期刊栏目：19

分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目81702406

在线出版日期：2020-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：520-524