小鼠miR-122重组慢病毒载体的构建和鉴定

摘要：

目的 构建携带miR-122的重组慢病毒表达载体,为研究miR-122的功能和作用机制奠定基础.方法 从小鼠基因组DNA采用PCR法扩增出pre-miR-122基因,测序后克隆至pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP逆转录病毒载体上,测序鉴定,病毒包装后,转染NIH3T3细胞,并通过绿色荧光蛋白进行病毒滴度测定.将重组慢病毒感染肝前体细胞(HPCs),利用实时定量PCR检测miR-122的表达.结果 重组慢病毒载体pCDH-CMV-miR-122-EF1-copGFP经PCR扩增及测序鉴定正确,并得到了滴度为(1-5)×106 IU/mL的病毒液.pCDH-CMV-miR-122-EF1-copGFP感染的肝前体细胞中miR-122表达显著增强.结论 成功构建了小鼠miR-122重组慢病毒,并在肝前体细胞中高效表达出miR-122,为进行miR-122的功能和机理奠定了良好的基础.

关键词：MicroRNA-122、载体构建、慢病毒

所属期刊栏目：12

分类号：Q987.1(人类学)

资助基金：国家自然科学基金30872700

在线出版日期：2012-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：92-95,102