东北七鳃鳗Lm-PHB2的生物信息学分析及多克隆抗体制备

摘要：

在首次获得七鳃鳗 Lm‐PHB2的全长cDNA 序列的基础上，对预测得到的Lm‐P HB2氨基酸序列进行了生物信息学和进化分析；经原核表达并大量提纯获得重组蛋白rLm‐PHB2，在此基础上，优化兔抗七鳃鳗抗体的免疫制备流程．结果表明：七鳃鳗Lm‐PHB2蛋白的理论分子质量约为33．25 ku ，理论等电点为9．85，为亲水性蛋白；信号肽预测结果表明其O RF区中无信号肽．该蛋白有1个位点可能发生N 型糖基化，不存在棕榈酰化位点；跨膜区预测表明L m‐P HB2仅在内膜区域存在跨膜结构．系统发育树分析表明Lm‐PHB2的进化地位在头索动物与脊椎动物之间，与物种进化规律基本一致．制备了效价≥64万且与重组蛋白rLm‐PHB2和天然Lm‐PHB2蛋白均有很强的特异性结合能力的多克隆抗体．Western Blot表明，Lm‐PHB2蛋白在七鳃鳗的心、肾、肝和肠中均有表达，其中，在心脏组织中表达量最高．本实验为 P H B2基因的进化研究提供了理论依据，并为七鳃鳗Lm‐PHB2蛋白功能研究奠定了基础．

关键词：七鳃鳗、Lm-PHB2、生物信息学、抗体制备

所属期刊栏目：39

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31501907；辽宁省教育厅科学研究一般项目2015287

在线出版日期：2017-01-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：523-529