七鳃鳗PHB2的真核表达与亚细胞定位

摘要：

以东北七鳃鳗心肌总RNA 反转录得到的cDNA为模板，PCR扩增 PHB2基因全长CDS区，并将其定向克隆至真核表达载体 pEGFP‐N1上，构建真核重组载体pEGFP‐N1‐Lm‐PHB2．提取重组质粒，去除内毒素，利用脂质体介导的方法转染CHL、HeLa和MCF‐7细胞，通过Western Blot检测转染后 Lm‐PHB2是否表达，Confocal观察EGFP融合蛋白在细胞中的表达及亚细胞定位．结果表明：PCR扩增片段与预期结果相符，双酶切和测序证明真核表达载体构建成功；Western Blot检测到Lm‐PHB2蛋白条带，Confocal观察到绿色荧光蛋白GFP ，证明真核重组载体成功表达；Lm‐PHB2蛋白主要定位在CHL细胞的细胞核，少量存在于基质和线粒体中，而在 HeLa和MCF‐7细胞中，Lm‐PHB2蛋白集中定位在细胞核中．本研究为七鳃鳗Lm‐PHB2的功能研究奠定了重要基础．

关键词：七鳃鳗、PHB2、真核表达、亚细胞定位

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：高等学校博士学科点专项科研基金项目20102136120002；大连市科学技术基金项目2010J21DW018

在线出版日期：2015-04-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：105-111