BARF1基因真核表达载体PIRES2-EGFP/BARF1的构建及鉴定

摘要：

提取B95-8细胞RNA,进行逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增BARF1基因,将其克隆到pUM-T载体,转化E.coli DH5α.筛选阳性克隆,提取质粒并用EcoRI和BamHI双酶切,电泳回收BARF1片段.同时用EcoRI和BamHI双酶切真核载体PIRES2-EGFP,电泳后回收载体PIRES2-EGFP并与BARF1片段连接;转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆.提取质粒并用EcoRI和BamHI双酶切鉴定插入方向,并进行测序分析.转染胃上皮细服GES-1后,观察细胞形态与行为变化.得到666 by的BARF1基因片段.经双酶切鉴定,BARF1基因已正确连接到PIRES2-EGFP真核表达载体;侧序结果与B95-8细胞株序列完全一致.BARF1基因转染GES-1细胞后,细胞由梭形圆化,黏着力减弱,重叠生长.结果表明成功地构建了携带EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)编码BARF1基因的真核表达载体.

关键词：EB病毒、BARF1基因、真核表达载体

所属期刊栏目：34

分类号：R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：传染病预防控制国家重点实验室开放课题项目2008SKLID302

在线出版日期：2011-06-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：98-101