七鳃鳗组织蛋白酶D的原核表达及功能初探

摘要：

组织蛋白酶D(cathepsin D,CTSD)是一类存在于溶酶体内的天冬氨酸蛋白内切酶,在蛋白质的水解过程中发挥重要作用.七鳃鳗是低等无颌类脊椎动物,通常依靠吸食宿主鱼类的血肉为生.近年研究发现七鳃鳗(Lampetra japonica)的口腔腺中含有组织蛋白酶D基因(Lamprey-cathepsin D,L-CTSD).前期实时定量PCR结果推测L-CTSD可能参与了七鳃鳗体内的消化过程.为了深入研究L-CTSD的生物学功能,实验构建了L-CTSD(Leu21-Val96)的原核表达载体pCold Ⅰ-L-CTSD,并将其转化至Rosseta blue表达菌中后采用IPTG进行诱导表达.研究发现L-CTSD以包涵体形式表达,通过变性和复性最终获得了可溶性的重组七鳃鳗组织蛋白酶D(recombinat lamprey-cathepsin D,rL-CTSD,43 kDa).功能实验结果表明:rL-CTSD 能够在酸性条件下降解血液中的主要蛋白质成分,如血红蛋白、纤维蛋白原和血清白蛋白等,提示L-CTSD参与了七鳃鳗的消化过程.为深入研究L-CTSD的生物学功能,阐明其在七鳃鳗口腔腺中的作用机制奠定了基础.

关键词：七鳃鳗、组织蛋白酶D、消化

所属期刊栏目：44

分类号：Q51(蛋白质)

资助基金：国家自然科学青年基金31301880;中国博士后科学基金第54批面上资助2013M541246;辽宁省高等学校优秀人才支持计划LJQ2015057

在线出版日期：2017-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：177-183