10.3969/j.issn.1671-3826.2011.06.46
原发性胆汁性肝硬化自身抗原M2蛋白的发酵与纯化
目的 利用补料分批培养技术大量发酵含有重组质粒pET-28/BPO的DH5-α大肠埃希菌,获得高效表达的M2蛋白,为诊断试剂盒的研发及原发性胆汁性肝硬化(PBC)发病机制研究作准备.方法 发酵过程中,溶氧控制在30％以上,温度37℃,基础培养基培养2.5h后补加甘油作为碳源的补料,4h后加入IPm至终浓度1mmol/L继续培养,诱导表达6h,收集菌体,溶解后按每克细菌加8 m50 mmol/L蛋白酶抑制剂PMSF,破菌后用安玛西亚金属鳌和层析系统纯化目的 蛋白.结果 发酵液最终菌体密度约15 g/L,0D60约8.0.表达的蛋白在上清中约占40％ ～ 50％,包涵体约占50％ ～60％,纯化得到的蛋白浓度约0.6 g/L.结论 分批补料并以甘油作为碳源,以IPTG为诱导剂,可在大肠埃希菌中获得高效表达的M2蛋白.为后期深入研究PBC发病机制奠定了基础.
发酵、分批补料、肝硬化、M2蛋白
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R575.22(消化系及腹部疾病)
苏州市科技发展计划社会发展应用基础研究项目SYSD20100027
2012-03-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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