补体片段C3a及其受体在纳米二氧化硅致肺损伤中水平变化
[背景]纳米二氧化硅(SiNPs)通过呼吸道、消化道和皮肤等进入人体,引起机体损伤,肺脏是主要受损器官之一.[目的]观察经呼吸道暴露SiNPs小鼠肺脏中补体活化片段C3a及其受体C3aR的表达情况,探讨C3a/C3aR是否参与SiNPs暴露致小鼠肺损伤.[方法]透射电子显微镜检测SiNPs(粒径 5～20 nm)超微结构,纳米粒度仪测定SiNPs流体动力学直径和表面Zeta电位.88只SPF级C57BL/6J小鼠进行随机化分组:空白对照组小鼠14只,不予以任何处理;溶剂对照组小鼠 14只,气管滴注 50 μL生理盐水;低剂量组、中剂量组、高剂量组小鼠各 20只,按体重分别滴注 7、21、35 mg·kg-1 SiNPs悬液 50 μL,每 3 d暴露一次,共 5次.在暴露结束后第 1天(模型 1天组)和第 15天(模型 15天组)麻醉小鼠,抽取支气管肺泡灌洗液(BALF)后处死小鼠,留取肺脏组织.通过HE染色观察肺组织形态学改变,酶联免疫吸附试验检测BALF中C3a表达量,免疫组化法观察肺组织中C3a、C3aR沉积情况,蛋白免疫印迹法检测C3aR蛋白表达水平,通过免疫荧光法对肺组织中C3a与C3aR进行定位以及半定量检测.[结果]SiNPs在生理盐水中会发生团聚,流体动力学直径为(185.60±7.39)nm,Zeta电位绝对值为(43.33±0.76)mV.模型 1天组和 15天组小鼠状态良好,模型 1天组中剂量组小鼠因操作原因导致死亡2只,解剖发现肺组织淤血,存在肺气肿,气管完整.其他剂量组小鼠无死亡.HE染色结果显示,SiNPs暴露小鼠肺部产生病理损伤,表现为肺泡壁增厚、炎性细胞浸润,随着剂量的升高病理损伤越严重,模型 15天组较 1天组稍有缓解,但仍存在病理改变.酶联免疫吸附试验结果显示:C3a在空白对照组和溶剂对照组表达量无差异(P>0.05);与溶剂对照组相比,中剂量组和高剂量组表达均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).免疫组化法结果显示C3a的沉积情况与酶联免疫吸附试验结果一致.蛋白免疫印迹法与免疫组化法结果均显示C3aR在空白对照组与溶剂对照组表达量低,而各剂量组表达量呈现随着剂量的升高而上升的趋势.免疫荧光法结果显示,模型 1天组和 15天组中空白对照组与溶剂对照组C3a与C3aR荧光信号弱,而SiNPs暴露各剂量组小鼠肺组织中荧光信号呈现随着剂量的升高表达逐渐增多的趋势.[结论]补体激活中C3a、C3aR表达升高可能与气管滴注SiNPs所致肺部损伤有关,提示C3a/C3aR可能参与SiNPs暴露引起的肺脏损伤.
纳米二氧化硅、气管滴注、肺损伤、C3a、C3aR
40
R114(卫生基础科学)
安徽医科大学研究生科研与实践创新项目YJS20230045
2023-09-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
877-883
