抑制TLR4/NF-κB通路逆转SiO2诱导的小鼠巨噬细胞炎症反应及M1促炎表型转化
[背景]二氧化硅(SiO2)粉尘可引起肺泡巨噬细胞中的炎症事件和细胞损伤,但具体作用机制不明.[目的]探究抑制TLR4/NF-κB信号通路在SiO2诱导的小鼠巨噬细胞炎症反应及巨噬细胞表型改变中的作用.[方法]16只6～8周龄的C57BL/6小鼠(雌雄各半)经50μL生理盐水或50μL 50 mg·mL?1的SiO2肺内灌注14、28 d后处死,苏木精伊红染色(HE)对肺组织进行病理学观察,采用免疫印迹法(WB)及免疫荧光法(IF)检测肺组织TLR4信号相关蛋白Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(Myd88)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)表达.小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞在暴露于SiO2前1 h加入TLR4抑制剂M62812进行预处理,后加入SiO2(100μg·cm2)协同刺激12 h,采用WB和IF检测TLR4介导的炎性信号关键蛋白TLR4、Myd88、磷酸化的核因子kappaB P65(P-NF-κB P65)、磷酸化的核因子1kappaB抑制蛋白α(P-1κbα)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)以及巨噬细胞M1表型标志蛋白一氧化氮合酶(iNOS)、分化抗原决定簇(CD86)和M2表型标志精氨酸酶-1(Arg-1)的表达.酶联免疫吸附实验(ELISA)检测在小鼠Raw264.7细胞中抑制TLR4后细胞培养液上清中炎症因子TNF-α、IL-6的含量.[结果]小鼠气道灌注SiO2后,HE染色结果显示第14天矽肺小鼠肺组织局部可见明显的肺纤维化结节.WB结果显示,与对照组相比,矽肺小鼠肺组织中TLR4信号相关蛋白TLR4、Myd88和TRAF6表达水平上调(P<0.05).IF结果显示,与对照组相比,矽肺小鼠肺组织中TLR4和Myd88荧光强度增强,提示TLR4信号激活.体外实验显示与对照组相比,100μg·cm2 SiO2处理小鼠Raw264.7细胞不同时间(6、12、24、48 h),TLR4、Myd88、P-NF-κB P65和P-1κbα的表达上调,其中TLR4和P-1κbα在6、12及24 h刺激组的上调有统计学意义(P?<?0.05),Myd88在12、24 h刺激组的上调有统计学意义(P?<?0.05),P-NF-κB P65在12 h刺激组的上调有统计学意义(P<0.05).采用抑制剂抑制TLR4表达后,可明显减弱SiO2诱导的TLR4及相关转导通路Myd88、TRAF6、P-NF-κB P65、TNF-α和IL-6表达,同时下调SiO2暴露导致的巨噬细胞M1表型标志iNOS的表达,上调M2表型标志物Arg-1的表达.[结论]抑制TLR4/NF-κB信号通路可以逆转SiO2诱导的小鼠巨噬细胞炎症反应及向M1促炎表型转化.
矽肺;TLR4/NF-κB信号通路;巨噬细胞极化;炎症反应
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R114(卫生基础科学)
国家自然科学基金;国家自然科学基金
2022-03-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
71-77
