10.13213/j.cnki.jeom.2021.20477
lncRNA MRAK050699对二氧化硅粉尘诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞上皮-间质转换的影响
[背景]矽肺发病机制未明且没有特效治疗方法,长链非编码RNA(lncRNA)在矽肺纤维化进程中或可发挥作用.[目的]探讨lncRNA MRAK050699对SiO2粉尘诱导大鼠肺泡II型上皮细胞(RLE-6TN细胞)发生上皮-间质转换(EMT)过程的影响.[方法]建立大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383细胞)与RLE-6TN细胞共培养体外矽肺模型,分为正常组、模型组、敲减对照组、敲减组.采用CCK8法检测NR8383细胞在10、20、40、80、160、320μg·cm-2 SiO2粉尘刺激下的活力,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测在0、20、40、80μg·cm-2粉尘刺激下的转化生长因子-β(TGF-β)含量,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测MRAK050699敲减效率.取四个6孔板,在前两个6孔板中正常培养RLE-6TN细胞24 h,后两个6孔板分别培养转染阴性对照病毒的RLE-6TN细胞24 h,和转染敲减MRAK050699病毒的RLE-6TN细胞24 h;同时在另四个6孔板中,插入Transwell小室,正常培养NR8383细胞24 h.NR8383细胞与RLE-6TN细胞铺板比例为1:2,之后将Transwell小室连同NR8383细胞一同转入RLE-6TN细胞的6孔板中,向后三组共培养体系的Transwell小室中加入40μg·cm-2 SiO2粉尘悬液150μL后,四组同时继续培养24 h,取Transwell小室下室的RLE-6TN细胞置于显微镜下观察,使用Western blotting及RT-qPCR法检测E-cadherin、N-cadherin、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平.[结果]CCK8、ELISA法结果显示SiO2剂量在40μg·cm-2时,细胞活力下降较为明显且可保证后续实验的有效进行,上清液中TGF-β表达水平是对照组的2.94倍,可用于后续实验;敲减组MRAK050699的表达水平相比敲减对照组明显下调,敲减效率约为50％(P<0.05).显微镜下观察共培养后RLE-6TN细胞形态,正常组细胞呈现典型的上皮样特征,为多边形、卵圆形且紧密连接.模型组细胞呈现间质样细胞形态,表现为长梭形、纺锤形,并且细胞间隙变宽.敲减对照组与模型组类似,呈现间质细胞形态.而敲减组的细胞基本处于紧密连接状态.各组细胞中E-cadherin、N-cadherin、α-SMA mRNA和蛋白表达水平差异均有统计学意义(F=28.11、35.72、15.26,P<0.05;F=328.78、51.84、13.39,P<0.05).与正常组相比,模型组E-cadherin mRNA和蛋白表达水平分别下降32％、67％,N-cadherin mRNA和蛋白表达水平分别上升至2.28、1.64倍,α-SMA mRNA和蛋白表达水平分别上升至2.74、1.66倍(均P<0.05);敲减组相较于敲减对照组,E-cadherin mRNA和蛋白表达水平上升,而N-cadherin、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05);模型组与敲减对照组的各基因mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05).[结论]MRAK050699在矽肺纤维化中发挥着重要的作用,可能参与了SiO2诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT过程.
矽肺、纤维化、长链非编码RNA、肺泡II型上皮细胞、肺泡巨噬细胞、上皮-间质转换
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R11(卫生基础科学)
国家自然科学基金;宁夏回族自治区高等教育科学研究项目;宁夏回族自治区自然科学基金
2021-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
231-237
