10.13213/j.cnki.jeom.2019.19056
孕期p,p'-DDE暴露对仔鼠胰岛细胞IGF2/H19基因印记和胰岛功能的影响及叶酸的干预作用
[背景]糖尿病是在全球都具有高发病率的一种慢性疾病,而我国确诊的糖尿病人数已经超过1亿.多项研究表明,2,2-双-(对氯苯基)-1,1-二氯乙烯(p,p'-DDE)暴露可以干扰葡萄糖代谢以及胰岛素分泌过程,与Ⅱ型糖尿病发病率升高之间具有相关性.另外,孕期p,p'-DDE暴露可以引起子代糖耐量受损,致子代糖尿病敏感性升高.[目的]研究p,p'-DDE孕期暴露对子代SD大鼠胰岛细胞胰岛素样生长因子-2(IGF2)/H19基因印记和胰岛功能的影响,以及甲基供体叶酸在此过程中的干预作用.[方法]采用逆行灌注法提取原代胰岛细胞并进行纯度、存活率与胰岛素分泌功能鉴定.将8～10周性成熟SD大鼠合笼交配,孕鼠随机分为对照组、p,p'-DDE染毒组和叶酸干预组,每组8只.p,p'-DDE染毒组和叶酸干预组于孕第8～15天每天按5mL/kg(以体重计)连续灌胃给予20 mg/mL p,p'-DDE;对照组给予等容积的玉米油;叶酸干预组整个孕期进食添加3.5 mg/kg叶酸的饲料.孕鼠自由分娩,每窝保留雌雄仔鼠各4只.各组仔鼠21d断乳后均摄食普通饲料.称取出生后1周、3周及8周仔鼠体重.提取出生后8周仔鼠胰岛细胞DNA和RNA,分别用亚硫酸氢盐法和实时荧光定量PCR法检测胰岛细胞IGF2/H19基因印记调控区域甲基化水平以及IGF2和H19 mRNA表达水平.出生后8周的仔鼠进行葡萄糖耐量试验,测定空腹及灌胃后15、30、60、120 min尾静脉血中的血糖水平.同时,灌胃前及灌胃后2h进行眼眶采血,ELISA测定血清中的胰岛素水平.[结果]提取的原代胰岛细胞经鉴定,纯度为(90±5)％,存活率大于90％,具有胰岛素分泌功能.p,p'-DDE染毒组仔鼠IGF2/H19基因印记调控区甲基化水平[(51.5±3.8)％]低于对照组[(55.9±3.3)％](P=0.031),与叶酸干预组[(52.8±1.9)％]相比差异无统计学意义.p,p'-DDE染毒组仔鼠IGF2 mRNA相对表达水平[(265.4±70.6)％]高于对照组(100％) (P=0.002)和叶酸干预组[(101.8±65.9)％](P=0.002);各组H19 mRNA相对表达水平差异无统计学意义.3组仔鼠在出生后1周、3周与8周体重差异均无统计学意义.p,p'-DDE染毒组仔鼠灌胃后15 min血糖水平[(10.89±1.17) mmol/L]高于对照组[(9.29±1.18) mmol/L] (P=0.026)和叶酸干预组[(9.25±0.95) mmol/L] (P=0.022).3组仔鼠空腹及餐后2h血清胰岛素水平差异均无统计学意义.[结论]p,p'-DDE孕期暴露可降低子代SD大鼠胰岛细胞IGF2/H19的印记调控区甲基化水平,上调IGF2 mRNA转录水平,诱导子代胰岛细胞功能受损.叶酸在该过程中具有一定的干预作用.
2、2-双(对氯苯基)-1、1-二氯乙烯(p、p’-DDE)、孕期暴露、基因印记、胰岛素样生长因子-2、胰岛功能、叶酸
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R114(卫生基础科学)
浙江省医药卫生科技计划项目2015114050;浙江省科技计划项目2016C33203
2019-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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