10.13213/j.cnki.jeom.2019.18618
微小RNA-218通过靶向调控LASP1影响食管癌细胞的生物学行为
[目的]微小RNA-218 (miR-218)作为一种肿瘤抑制因子,参与多种肿瘤的发生与进展.肌动蛋白骨架蛋白1 (LASP1)是一种新的肌动蛋白结合蛋白,参与细胞骨架的重组调控及细胞迁移,与肿瘤的增殖、侵袭和转移密切相关.食管癌细胞中miR-218与LASP1基因间的调控关系尚未有报道,本研究对食管癌细胞中miR-218是否可以通过靶向调控LASP1而发挥抑癌作用进行初步探讨.[方法]应用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测3株食管癌细胞(EC109、EC9706、KYSE510)和1株永生化食管上皮细胞(Het-1A)中miR-218的表达水平.以EC109为靶细胞,分别转染miR-218模拟物(miR-218 mimic)、miR-218 mimic的空载体对照(miR-NC)、LASP1的小干扰RNA (si-LASP1)、miR-218 mimic和si-LASP1 (miR-218 mimic+ si-LASP1)以及si-LASP1的空载体对照(si-NC).采用qRT-PCR和Western blot法检测细胞的转染效果,采用细胞增殖与毒性检测试剂盒观察各组细胞生长曲线,采用细胞平板克隆形成实验、Transwell小室法和流式细胞术检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡,通过生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验对miR-218的靶基因进行预测及验证.[结果]KYSE510、EC109和EC9706中miR-218表达水平分别为Het-1A的0.32％、1.81％和2.15％(均P＜0.05).生物信息学分析结果显示LASP1的3’非编码区有miR-218的结合位点,miR-218 mimic转染组EC109中LASP1 mRNA表达水平是miR-NC转染组的28.20％ (P＜0.05),Western blot结果显示过表达miR-218可下调LASP1蛋白表达水平.双荧光素酶报告基因实验结果显示LASP1-WT(野生型)+miR-218 mimic组的荧光素酶活性为0.31±0.02,低于LASP1-WT +miR-NC组(0.56±0.04)和LASP1-MUT(突变型)+miR-218 mimic组(0.49±0.07)(均P＜0.05).与miR-NC组相比,转染miR-218 mimic可抑制EC109的生长速率、迁移和侵袭能力(均P＜0.05),促进细胞凋亡(P＜0.05).转染si-LASP1的EC109观察到相同的结果趋势.与si-LASP1单独转染组比较,miR-218 mimic和si-LASP1共转染组细胞生长速率下降,平板克隆形成率降低(P＜0.05),迁移和侵袭能力降低(P＜0.05),凋亡增加(P＜0.05).[结论]miR-218在食管癌细胞中低表达;在EC109中miR-218可通过直接靶向调控LASP1基因的表达,抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,从而在食管癌的发展进程中发挥抑癌作用.
食管癌、miR-218、LASP1、增殖、迁移、侵袭、凋亡
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R135(劳动卫生)
国家自然科学基金项目81872588,81573191,81573108
2019-05-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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