10.13213/j.cnki.jeom.2019.18487
JNK/AP-1信号通路在百草枯诱导肺泡上皮细胞间充质转变中的作用
[目的]探讨c-jun氨基末端激酶(JNK)/转录因子激活蛋白-1(AP-1)信号通路在百草枯致大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞间发生上皮-间充质转变(EMT)中的作用.[方法]体外培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞RLE-6TN,终浓度0、25、50、100、200、300、400μmol/L百草枯处理细胞24 h,终浓度200 μmol/L百草枯分别处理细胞0、12、24、36、48、60、72 h,倒置相差显微镜观察细胞形态学的改变;四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞相对存活率,确定剂量和时间-效应关系;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;免疫荧光、免疫印迹法(Westernblot)分别检测上皮标志蛋白E-cad、ZO-1和间质标志蛋白FSP-1、α-SMA表达水平;Westernblot检测JNK/p-JNK、c-jun/p-c-jun、c-fos/p-c-fos蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验检测AP-1的转录活性,评估百草枯对JNK信号通路的激活作用.[结果]200 μmol/L百草枯诱导细胞由卵圆形或多边形的上皮细胞变成长梭形的间质细胞,细胞间连接消失,且时间越长形态学改变越明显.与对照组相比,100、200、300、400 μmol/L百草枯染毒组的细胞存活率明显降低(P＜0.05),200 μmol/L百草枯诱导细胞不同时间(24、36、48、60、72h)的细胞存活率明显降低(P＜0.05).200 μmol/L百草枯诱导细胞不同时间(12、24、36h):细胞凋亡率随诱导时间的延长而增加,尤其36h诱导组的细胞凋亡率较对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞迁移指数、侵袭细胞数均明显升高(P＜0.05);上皮细胞标记蛋白E-cad、ZO-1表达下调,且下调的趋势随时间延长更加明显(P＜0.05);间质细胞标记蛋白FSP-1、α-SMA表达随时间的延长逐渐升高(P＜0.05);与对照组相比,100、200、300 μmol/L百草枯染毒可诱导p-JNK、p-c-jun、p-c-fos蛋白表达明显上调;200、300μmol/L百草枯染毒组较对照组比较,AP-1转录活性明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]百草枯呈剂量和时间依赖方式影响上皮细胞活性.百草枯能够诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞发生EMT,JNK/AP-1信号通路可能参与了百草枯诱导肺泡上皮细胞EMT的发生.
百草枯、Ⅱ型肺泡上皮细胞、上皮-间充质转变、JNK信号通路、AP-1
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R139+.3(劳动卫生)
国家自然科学基金项目81360435;宁夏高等学校一流学科建设公共卫生与预防医学学科资助项目NXYLXK2017B08
2019-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
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