苯并[α]芘对人支气管上皮细胞H19与SAHH表达的影响

摘要：

[目的]探讨苯并[α]芘(BaP)对人支气管上皮细胞(16HBE)长链非编码RNA(IncRNA)H19和S-腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHH)表达的影响,并初步探究H19和SAHH的关系.[方法]用不同浓度(1、2、4、8、16、32.μmol/L)BaP染毒16HBE细胞24h,设置未处理组(仅加培养液)和溶剂对照组;以16 μmol/L BaP染毒16HBE细胞不同时间(1、2、4、8、12、24h),以0h为对照组.用实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测H19的表达水平;通过免疫印迹试验(Western blot)检测SAHH的蛋白表达水平;采用lncRNA原位荧光杂交(FISH)技术结合激光共聚焦显微镜观察H19和SAHH的定位.[结果] RT-PCR结果显示,溶剂对照组与未处理组相比,H19表达差异无统计学意义.随着染毒浓度和时间的增加,16HBE细胞H19表达呈现逐渐升高的趋势.8、16、32μmol/L BaP染毒24h及16 μmol/L BaP染毒4、8、12、24h时,H19表达量分别高于溶剂对照组和0h组(均P＜0.05).BaP染毒浓度为32 μtmol/L时,H19表达量达到峰值,较溶剂对照组增加了78.0％;16μmol/L BaP染毒24h时,H19表达量达到峰值,较0h组增加了48.3％.Western blot结果显示,溶剂对照组与未处理组的SAHH表达差异无统计学意义.随着染毒时间和浓度的增加,16HBE细胞SAHH表达逐渐降低(P＜0.05).BaP浓度为32μmol/L时,SAHH表达降至最低,较溶剂对照组降低了37.2％;16μmol/L BaP染毒24h时,SAHH表达降至最低,较0h组降低了33.1％.免疫荧光结果显示,H19和SAHH均在细胞质及细胞核中表达,表达主要分布在核周质及核膜;与0h组相比,16 μmol/L BaP染毒细胞24h后H19在核周质处的荧光加强,而SAHH的荧光明显减弱,两者在胞质、胞核中共定位的荧光强度增加.[结论] BaP染毒可引起16HBE细胞H19表达升高而SAHH表达降低;H19与SAHH在细胞内的共定位表达提示两者可能存在相互作用.

关键词：苯并[α]芘、长链非编码RNA H19、逆转录-聚合酶链式反应、S-腺苷高半胱氨酸水解酶、原位荧光杂交

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分类号：R114(卫生基础科学)

资助基金：山西省自然科学基金项目201701D121146;国家自然科学基金项目81273041

在线出版日期：2018-06-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：316-322