荧光转基因斑马鱼Tg(ere-vtg:egfp)质粒的构建及验证

摘要：

[目的]本研究旨在构建一种对17α-炔雌醇(17a-ethynylestradiol,EE2)敏感的荧光转基因斑马鱼模型,提供一种可直观地监测水中环境雌激素(environmental estrogens,EEs)污染程度的生物检测方法.[方法]构建Tg(ere-vtg:egfp)质粒,显微注射到1～2个细胞期的斑马鱼胚胎中,经10 ng/L EE2暴露发出绿色荧光,建立能稳定遗传的Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼系.将转基因斑马鱼纯合子幼鱼和胚胎暴露于不同浓度的EE2进行敏感性鉴定,并将转基因斑马鱼纯合子幼鱼暴露于多种EEs、雌激素结构类似物中进行特异性鉴定.[结果]经显微注射Tg(ere-vtg:egfp)质粒并进行基因筛选,成功构建Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼.EE2诱导Tg(ere-v喀egfp)转基因斑马鱼表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)与浓度、时间有关.当EE2质量浓度大于0.1 ng/L(131 hpf)时,可见转基因斑马鱼胚胎表达明显的GFP.当暴露于不同结构的雌激素类化合物时,Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼幼鱼呈现GFP表达,而对于非雌激素类化合物在各浓度下均没有GFP表达.[结论]采用Tg(ere-vegp)转基因斑马鱼可直观地动态监测环境中EEs污染情况.

关键词：环境雌激素、转基因斑马鱼、卵黄蛋白原、绿色荧光蛋白、环境监测

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分类号：R114(卫生基础科学)

资助基金：国家自然科学基金项目31540038;上海市科委实验动物研究专项15140901200;上海市第四轮公共卫生三年行动计划重点学科建设计划—环境卫生学与劳动卫生学15GWZK0201;上海市青年科技英才扬帆计划15YF1410000

在线出版日期：2017-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：511-516