RING2对苯并[a]芘导致的人支气管上皮细胞BPDE-DNA加合物及CHK1的影响

摘要：

[目的]探讨泛素连接酶RING2对苯并[a]芘(BaP)导致的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)BPDE-DNA加合物及周期检测点激酶1(CHK1)表达水平的影响.[方法]用不同浓度的BaP(0、1、2、4、8、16、32 μmol/L)染毒BEAS-2B细胞24h,以16 μmol/L BaP染毒BEAS-2B细胞不同时间(0、1、2、4、8、12、24h);通过siRNA干扰技术降低BEAS-2B细胞中泛素连接酶RING2的表达水平,用16μmol/LBaP染毒BEAS-2B和BEAS-2B(siRNA-RING2)细胞24h.使用免疫组化荧光法检测细胞中BPDE-DNA加合物的表达隋况,采用Western blot检测细胞中CHK1及其S345位点磷酸化的水平.[结果]免疫组化荧光法结果显示,与正常对照组相比,转染前后染毒组的荧光强度均增加(P＜0.01),提示染毒后BPDE-DNA加合物增加,其中BESA-2B(siRN A-RING2)染毒组的荧光强度较正常染毒组的增加了32％.Western blot结果显示,随着染毒时间和染毒浓度的增加,BESA-2B的CHK1及CHK1 S345-p的水平逐渐增加(P＜0.01);16μmol/L BaP染毒BEAS-2B(siRNA-RING2)细胞24h后,其CHK1及CHK1 S345-p水平较对照组明显下降(P＜0.01);析因分析表明,转染与染毒均对CHK1及CHK1 S345-p的表达量有影响,两因素间存在交互作用(P＜0.01),转染后染毒组与不染毒组CHK1及CHK1 S345-p水平的差异,与正常细胞组的相比,分别降低了54％和51％;协方差分析控制染毒因素后,BESA-2B(siRNA-RING2)组CHK1及CHK1 S345-p水平的修正均数(分别为0.77和0.89)较BEAS-2B组的修正均数(分别为1.24和1.32)明显降低(P＜0.01).[结论] RING2低表达的细胞DNA对BaP更加敏感,这提示RING2可能通过影响CHK1及其磷酸化水平来调控细胞周期的进程,进而影响DNA的损伤修复.

关键词：苯并[a]芘、泛素连接酶RING2、BPDE-DNA加合物、周期检测点激酶1

所属期刊栏目：34

分类号：R114(卫生基础科学)

资助基金：国家自然科学基金项目81273041

在线出版日期：2017-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：189-195