10.13213/j.cnki.jeom.2016.16327
煤尘致人胚肺成纤维细胞纤维化中胸腺分化抗原-1 DNA甲基化的变化
[目的]观察煤尘通过单核细胞源性巨噬细胞致人胚肺成纤维细胞MRC-5纤维化改变过程中,胸腺分化抗原-1(Thy-1)表达及其DNA甲基化变化. [方法]用含500 nmol/L佛波酯的1640培养液培养人单核细胞,24h诱导分化后成巨噬细胞;收集100μg/mL煤尘刺激巨噬细胞24h的培养上清,再刺激MRC-5 24、48、72h,对照组分别为正常巨噬细胞和正常人胚肺成纤维细胞.酶联免疫分析法测定巨噬细胞上清液中IL-6、TGFβ1蛋白表达水平和MRC-5中TC F-β1蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测胶原蛋白-Ⅰ、胶原蛋白-Ⅲ、α-SMA、Thy-1、DNA甲基化转移酶(DNMTs)1、3a、3b mRNA的表达,巢式降落式特异性PCR检测Thy-1DNA甲基化. [结果]煤尘组巨噬细胞上清中IL-6、TGF-β1蛋白表达水平与对照组比较明显增加[(5.542±0.953)ng/mLvs(2.498±0.456)ng/mL,(462.435±56.620) ng/Lvs(329.971±17.911)ng/L](P＜ 0.05);巨噬细胞染尘后上清刺激MRC-5 24、48、72h,TGF-β1蛋白表达[(223.813±5.723),(263.757±17.254),(326.720±11.263)ng/L]和胶原蛋白Ⅰ mRNA表达(3.38±0.37,3.87±0.28,4.40±0.10)、胶原蛋白ⅢmRNA表达(1.65 ±0.12,2.37±0.19,2.66±0.28)、a-SMA mRNA表达(2.41±0.47,4.76±0.10,4.23±0.63)均升高;且均存在时间效应关系,r值分别为0.965,0.876,0.899,0.667(P＜0.05);煤尘组MRC-5中Thy-1mRNA表达均低于对照组,随着巨噬上清液作用时间的增加,其表达逐渐降低(0.634 ±0.014,0.448±0.055,0.352±0.044),呈负相关(r=-0.945,P＜0.05);煤尘组MRC-5中DNMTs mRNA表达均较对照组升高(DNMT1:1.57±0.12,2.51 ±0.33,7.00±0.71;DNMT3a:0.74±0.09,2.89±0.52,3.31 ±0.53;DNMT3b:1.46±0.18,2.25±0.44,5.33±0.16),且均存在时间效应关系,r值分别为0.924,0.890,0.937(P＜0.05);煤尘组Thy-1 DNA甲基化水平较对照组升高(0.506±0.014,0.536±0.017,0.570±0.032),存在时间效应关系(r=0.682,P＜0.05). [结论]煤尘通过单核细胞源性巨噬细胞致人胚肺成纤维细胞纤维化发生,在此过程中Thy-1DNA发生甲基化,Thy-1mRNA表达降低,可能是煤尘致肺纤维化发生的重要表观遗传机制之一.
煤尘、单核细胞源性巨噬细胞、人胚肺成纤维细胞、纤维化、胸腺分化抗原-1、DNA甲基化
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R114(卫生基础科学)
2013年宁夏自治区科技支撑计划项目DNA甲基化抑制剂在职业性肺纤维化防治中的作用研究,无编号
2016-09-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
742-748
