亚砷酸钠对人皮肤角质形成细胞MGMT基因组蛋白乙酰化及转录与表达的影响
[目的]了解不同剂量亚砷酸钠(NaAsO2)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)中O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)基因组蛋白乙酰化调控、mRNA转录及蛋白表达的影响.[方法]以25.00、12.50、6.25、3.13μmol/LNaAsO2重复间隔处理HaCaT细胞72h(NaAsO2处理24h,隔天再次用NaAsO2进行相同的处理,重复处理3次).定量染色质免疫沉淀技术(Q-ChIP)检测MGMT基因转录调控区(CHIP1、CHIP2区域)及MGMT基因编码区(CHIP3区域,对照区域)组蛋白乙酰化修饰水平;实时荧光定量PCR(Q-PCR)和免疫印迹分析分别检测MGMT基因的mRNA转录和蛋白表达.设不染毒的HaCaT细胞为空白对照(0.00μmol/L),人表皮鳞癌细胞株A431为阳性对照.[结果]0.00、3.13、6.25、12.50、25.00μmol/L NaAsO2处理细胞中,MGMT基因转录调控区CHIP1区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为176.68±8.50、175.71±18.14、161.26±16.28、146.23±24.00和82.64±33.87,差异有统计学意义(F=28.809,P<0.05);组蛋白H4乙酰化水平分别为183.59±11.98、180.84±24.10、166.52±5.48、156.87±10.64和103.42±7.04,差异有统计学意义(F=36.493,P<0.05).CHIP2区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为171.11±16.54、167.55±8.97、156.51±8.59、135.88±16.55和82.01±3.96,差异有统计学意义(F=49.626,P<0.05);组蛋白H4乙酰化水平分别为117.23±16.21、143.29±10.59、135.87±7.44、105.48±7.56和78.79±6.92,差异有统计学意义(F=25.438,P<0.05).编码区CHIP3区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为37.53±6.23、35.57±5.85、40.81±4.45、42.18±1.23和41.87±5.71,差异无统计学意义(F=2.341,P>0.05);组蛋白H4乙酰化水平分别为40.78±2.42、38.56±4.66、39.47±2.88、33.13±3.48和31.48±4.99,差异无统计学意义(F=3.027,P>0.05).MGMT基因mRNA转录相对表达量分别为1.19829±0.15997、1.518 31±0.18054、1.42522±0.18039、1.01454±0.09679和0.88772±0.02000,差异有统计学意义(F=37.359,P<0.05):MGMT蛋白相对表达量分别为1.06619±0.061 24、1.17447±0.06475、0.848 83±0.05701、0.47163±0.02334和0.24034±0.01443,差异有统计学意义(F=20.687,P<0.05).[结论]砷通过导致MGMT基因转录调控区组蛋白去乙酰化,抑制MGMT基因mRNA转录及蛋白表达,是砷致皮肤损害的重要机制之一.
砷、MGMT基因、组蛋白乙酰化、mRNA转录、蛋白表达、HaCaT细胞
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R114(卫生基础科学)
国家自然科学基金30960337;30760225;贵州省重大专项基金黔科合重大专项字[2006]6016号;贵州省科学技术基金资助项目黔科合J字[2009]2188号;贵阳医学院研究生教育创新基地建设专项经费B200902;贵州省卫生厅科学技术基金gzwkj2008-1-002
2011-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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