10.3969/j.issn.1009-0460.2021.04.007
微小RNA-1258靶向调控Wnt7b对肝癌细胞迁移侵袭和Wnt/β-catenin通路的影响
目的 探讨微小RNA-1258(miR-1258)调控Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)通路对肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭和迁移的影响.方法 基于Ualcan数据库分析肝癌组织的miR-1258水平.将SMMC-7721细胞分为4组:空白对照组、阴性对照组、miR-1258模拟物(miR-1258-M)组(转染miR-1258 mimics)和miR-1258-M+SKL2001组(转染miR-1258 mimics和Wnt/β-catenin通路激动剂SKL2001),采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-1258水平,CCK-8实验、划痕实验和Transwell小室实验评估细胞增殖、迁移和侵袭能力,qPCR和Western blotting检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白Wnt7b、β-cate-nin、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK-3β)和基质金属蛋白酶(MMP)-9的水平,双荧光素酶报告系统验证miR-1258与Wnt7b间的靶向关系.结果 Ualcan数据库分析显示369例原发肝癌组织的miR-1258中位水平为0.156,低于49例正常肝组织的14.113(P<0.05).与空白对照组和阴性对照组比较,miR-1258-M组转染48、72 h时的增殖活力降低(P<0.05),而miR-1258-M+SKL2001组的增殖活力较miR-1258-M组升高(P<0.05).miR-1258-M组的划痕愈合率为(18.774±0.462)%,低于空白对照组的(77.597±2.535)%、阴性对照组的(73.576±1.921)%和miR-1258-M+SKL2001组的(69.349±3.136)%(P<0.05),穿膜细胞数为(101.425±4.631)个,少于空白对照组的(144.876±4.807)个、阴性对照组的(165.532±15.235)个和miR-1258-M+SKL2001组的(152.026±3.172)个(P<0.05).与其余三组相比,MiR-1258-M组的Wnt7b、β-catenin和MMP-9水平降低,而p-GSK-3β 水平升高,差异有统计学意义(P<0.05).空白对照组、阴性对照组和miR-1258-M+SKL2001组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05).MiR-1258 mimics明显降低野生型Wnt7b转染细胞的荧光素酶活性(P<0.05),而对突变型Wnt7b转染细胞的荧光素酶活性影响无统计学意义(P>0.05).结论 miR-1258在肝癌中发挥抑癌作用且可能通过抑制Wnt/β-catenin信号抑制肝癌细胞的增殖和迁移侵袭能力,可作为肝癌治疗的潜在靶点.
肝癌、微小RNA-1258、迁移侵袭、Wnt/ β-catenin通路
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R735.7(肿瘤学)
2021-05-24(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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