miR-215-3p通过调控CXCR4逆转结肠癌HCT8细胞5-FU耐药的实验研究

摘要：

目的 探讨miR-215-3p对CXC结构趋化因子受体4(CXCR4)及CXCR4/RhoA信号通路的调控作用,以及对结肠癌HCT8细胞5-FU耐药的影响.方法 体外培养HCT8细胞和HCT8/5-FU耐药细胞分别作为HCT8组和HCT8/5-FU组,将miR-215-3p mimics转染至HCT8/5-FU细胞作为miR-215-3p组,转染无义序列为NC组.采用MTT法检测各组细胞增殖能力的改变,计算半数抑制浓度(IC50).采用双荧光素酶报告实验验证miR-215-3p与CXCR4的靶向关系.采用Western blotting法检测各组CXCR4/RhoA信号通路相关蛋白CXCR4、RhoA、PI3K、RhoGEF、PAK、PKN1和ROCK的表达水平.结果 5-FU对HCT8细胞和HCT8/5-FU细胞的IC50分别为19.98μmol/L和105.86 μmol/L.HCT8/5-FU的耐药指数为5.30.HCT8/5-FU组miR-215-3p表达水平为0.54±0.13,低于HCT8组(P＜0.05).miR-215-3p组miR-215-3p表达水平为1.49±0.22,高于NC组和HCT8/5-FU组(P＜0.05).1、3、9、27、81μmol/L 5-FU对miR-215-3p组HCT8/5-FU细胞增殖抑制率分别为(14.46±1.79)％、(20.37±2.64)％、(54.87±3.81)％、(79.51±3.67)％和(84.62±4.15)％;相同浓度下,miR-215-3p组细胞增殖抑制率高于HCT8/5-FU组和NC组(P＜0.05).miR-215-3p可抑制野生型CXCR4 3’-UTR报告基因载体的荧光素酶活性,而对突变型CXCR4 3’-UTR的荧光素酶活性无影响.miR-215-5p组CXCR4、RhoA、PI3K、RhoGEF、PAK、PKN1和ROCK蛋白表达水平分别为0.41±0.07、0.34±0.08、0.82±0.15、0.29±0.04、0.39±0.06、0.30±0.03和0.51±0.08,均低于其余3组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 上调miR-215-3p表达可逆转HCT8/5-FU细胞株对5-FU的耐药性,其可能的作用机制可能与负性调控CXCR4/RhoA通路的活性有关.

关键词：结肠癌、miR-215-3p、CXCR4、5-FU、耐药性

所属期刊栏目：24

分类号：R735.3+5(肿瘤学)

在线出版日期：2019-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：513-517