20（S）-人参皂苷Rg3对肝癌细胞自噬介导的索拉非尼敏感性的影响?

摘要：

目的：探索中药单体20（ S）-人参皂苷Rg3（ Rg3）对肝癌细胞自噬介导的索拉非尼药物敏感性的影响。方法以人肝癌细胞株Hep3B为观察对象，分别接受Rg3、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）、索拉非尼、Rg3＋索拉非尼和3-MA＋索拉非尼处理，采用MTT法检测Hep3B细胞对Rg3、索拉非尼及3-MA的敏感性，CCK-8法检测Rg3、3-MA分别联合索拉非尼后对Hep3B细胞的增殖抑制作用，q值判断联合用药效果；LC3 Conversion实验及LC3 Turnover实验检测Rg3和索拉非尼对Hep3B细胞自噬的影响，Western blotting检测Rg3和索拉非尼对自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅰ／LC3-Ⅱ、p62水平的影响。结果 MTT检测显示，3种药物对Hep3B细胞的增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性。 CCK-8检测显示，低、中浓度（0．5、1μg／ml）索拉非尼联合Rg3或3-MA对Hep3B细胞抑制作用均增强（ P均＜0．01），表现为协同作用；高浓度（2μg／ml）索拉非尼联合Rg3亦呈抑制增强作用（ P＜0．05），但联合3-MA的差异无统计学意义（ P＞0．05），高浓度索拉非尼与两药联合后均表现为相加作用。 LC3 Conversion实验显示，随着药物作用时间的延长，Rg3及索拉非尼均使LC3-Ⅱ蛋白水平逐渐升高；LC3 Turnover实验显示，索拉非尼联合溶酶体抑制剂氯喹（ CQ）后，LC3-Ⅱ蛋白水平明显升高（ P＜0．01），而Rg3联合CQ前后则无明显差异（ P＞0．05）。 Western blotting检测显示，与对照组相比，Rg3、索拉非尼均可使Beclin1蛋白表达升高（ P＜0．01），索拉非尼联合3-MA后Beclin1水平明显降低（ P＜0．01），而联合Rg3后下降不明显（ P＞0．5）。三药均可使LC3-Ⅱ水平升高（ P＜0．05），索拉非尼联合Rg3后LC3-Ⅱ水平高于索拉非尼单药（ P＜0．01），而联合3-MA后LC3-Ⅱ水平无明显变化（ P＞0．05）。3-MA、索拉非尼作用后，p62蛋白水平明显低于对照组（ P＜0．05），索拉非尼联合Rg3后p62水平明显升高（ P＜0．01），联合3-MA后水平明显降低（ P＜0．01）。结论索拉非尼可通过增加Beclin1的表达诱导肝癌细胞自噬导致药物敏感性下降，Rg3可增加索拉非尼的敏感性，其机制可能是通过抑制自噬降解从而抑制肝癌自噬活性来实现的。

关键词：肝细胞癌、20(S)-人参皂苷Rg3、索拉非尼、自噬、药物敏感性

所属期刊栏目：21

分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：南京军区医学科技创新基金资助项目09Z012

在线出版日期：2016-06-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：297-303