RGD修饰的腺病毒介导LIF和IL-24双基因共表达对MEG01白血病细胞的抑制作用?
目的：利用RGD修饰改造白血病抑制因子（ LIF）和白细胞介素?24（ IL?24）双基因共表达腺病毒载体，以提高感染效率，探讨其对人白血病MEG01细胞的抑制作用。方法同源重组法构建RGD修饰的表达LIF、IL?24的腺病毒载体Ad．RGD?LIF、Ad．RGD?IL24和Ad．RGD?LIF?IL24。在QBI?293A细胞中扩增腺病毒，检测病毒滴度。流式细胞仪检测各组腺病毒载体对MEG01细胞的感染效率。应用Western blotting检测目的基因LIF、IL?24在MEG01细胞中的表达。 CCK?8法检测各组腺病毒载体Ad．RGD?LIF、Ad．RGD?IL24、Ad．RGD?LIF?IL24感染MEG01细胞后对细胞增殖的影响。 PE?AnexinV／7?AAD双染后，经流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。 Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。 PI染色后，流式细胞仪检测目的基因表达对MEG01细胞周期的影响。实时定量PCR检测细胞周期调控基因p21和E2F1的表达。结果成功构建了RGD修饰的腺病毒载体Ad．RGD?LIF、Ad．RGD?IL24和Ad．RGD?LIF?IL24。 RGD修饰后的腺病毒能够显著增强对MEG01细胞的感染效率。CCK?8检测显示，与PBS组比较，携带单个目的基因的腺病毒载体Ad．RGD?LIF和Ad．RGD?IL24在第5 d对细胞生长的抑制率分别为29?2％和31?5％，均能够显著抑制MEG01细胞的生长；携带Ad． RGD?LIF?IL24双基因组的抑制率达42?5％，优于单基因组，差异均有统计学意义（P＜0?05）。凋亡检测显示，与PBS组（4?5％）和空病毒组Ad．RGD（7?4％）比较，Ad．RGD?IL24（20?9％）、Ad． RGD?LIF （17?8％）均能够显著促进细胞凋亡，且 Ad． RGD?LIF?IL24双基因组（29?7％）的促凋亡作用更强。Western blotting显示，LIF和IL?24能够提高促凋亡蛋白p53、Bax的表达，同时抑制抗凋亡蛋白Bcl?xl的表达。目的基因LIF、IL?24过表达会影响MEG01细胞周期的进程，使细胞阻滞在G2期。实时定量PCR显示，LIF和IL?24能够上调细胞周期调控基因p21的转录，抑制E2F1的表达。结论 LIF和IL?24过表达的腺病毒载体在体外通过调节p53、Bax、Bcl?xl的表达，影响白血病细胞MEG01的生长，诱导其凋亡，并通过调控p21、E2F1的水平影响细胞周期的进程。
腺病毒、白血病抑制因子(LIF)、白细胞介素-24(IL-24)、MEG01细胞、生长抑制、凋亡
R733.7(肿瘤学)
无锡市社会发展科技资助项目CSE01N1235
2015-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
385-392
