构建慢病毒载体介导RNA干扰沉默肝癌细胞Foxq1的表达

摘要：

目的 构建慢病毒载体将Foxq1干扰序列递达到人肝癌7721细胞中,观察该细胞中Foxq1的表达并评估慢病毒载体的有效性.方法 体外合成与筛选具有Foxq1干扰功能的核酸片段(siRNA Foxq1),通过重组技术将其插入到慢病毒三质粒系统的转移质粒中,利用包装细胞(293T)将三质粒系统组装为完整的逆转录慢病毒颗粒,然后感染肝癌细胞.采用Western blot和RT-qPCR分别检测Foxq1蛋白和mRNA表达.同时构建与检测不含有siRNA Foxq1序列的直接三质粒系统包装的空病毒载体对照组.结果Foxq1-834-siRNA具有较强的抑制Foxq1 mRNA功能,其抑制效率达90.17%;基因测序证实体外合成的siRNA Foxq1基因序列成功插入到慢病毒转移质粒中;荧光显微镜观察证明肝癌细胞中持续表达Foxq1-834-siRNA的绿色荧光信号,且信号强度随时间推移逐渐增强;采用RT-qPCR和Western blot检测结果证实慢病毒载体感染的细胞中Foxq1 mRNA和蛋白表达量较对照组明显下降(P<0.001).结论 筛选到有效抑制Foxq1的siRNA Foxq1序列,通过构建慢病毒载体感染细胞能有效的将体外合成的siRNA Foxq1递达到癌细胞中,并能抑制癌细胞中Foxq1的表达,为进一步研究肝癌中Foxq1的功能提供有效的工具.

关键词：慢病毒、Foxq1、RNA干扰、肝癌细胞株(7721细胞)

所属期刊栏目：29

分类号：R735.7;R73-3(肿瘤学)

资助基金：南通大学医学院资助项目YXY2010-08;南通大学资助项目12Z006;江苏高校优势学科建设工程资助

在线出版日期：2013-09-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：832-835,839