胆道闭锁中胆固醇活化CD177+中性粒细胞致胆管损伤的实验研究

摘要：

目的 通过实验研究胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿总胆固醇(total cholesterol,TC)对胆管损伤的影响,并探讨其免疫学机制.方法 回顾性收集2011-2020年间广州市妇女儿童医疗中心收治的118例经术中胆管造影确诊的BA患儿、80例同龄婴儿肝炎综合征(infantile hepatitis syn-drome,IHS)患儿以及165例无肝病学证据且无肝功能异常的同龄正常对照(normal control,NC)儿童外周血TC含量.分析TC与胆管损伤各指标及多种与BA形成相关免疫细胞之间的关联.在体外CD177+中性粒细胞与胆道上皮细胞(biliary epithelial cell,BEC)共培养体系中加入胆固醇,观察其对BEC凋亡的影响,同时观察加入胆固醇刺激后CD177+中性粒细胞内相关指标的变化;根据外周血TC检测数值将BA患儿分为高胆固醇BA组、正常胆固醇BA组,通过RNA测序分析,比较高胆固醇组、正常胆固醇组BA患儿CD177+中性粒细胞基因表达差异.结果 BA患儿外周血TC含量为4.9(4.0,6.1)mmol/L,高于 NC 组的 3.7(3.1,4.1)mmol/L 及 IHS 组的 4.2(3.3,5.4)mmol/L,差异有统计学意义(P＜0.05);BA患儿外周血TC含量[4.9(4.0,6.1)mmol/L]与胆管损伤指标γ-谷氨酰转移酶(gam-ma-glutamyltransferase,GGT)含量[497.0(298.5,843.0)U/L]呈正相关(r=0.401,P＜0.05),同时与直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)、总胆汁酸(total bile acid,TBA)含量呈正相关(r=0.338,P＜0.05;r=0.235,P＜0.05);在肝脏组织胆管细胞凋亡数量比例层面,高胆固醇BA组为0.724±0.146,正常胆固醇BA组为0.232±0.141,NC组(患儿年龄相近门静脉海棉样变儿童)为0.242±0.228,高胆固醇BA组与其余两组间差异有统计学意义(P＜0.05);BA患儿外周血TC含量[4.4(3.1,5.5)mmol/L]与外周血CD177+中性粒细胞比例[(26.5±6.4)％]呈正相关(r=0.503,P＜0.05),与外周血单核细胞[1.0(0.8,1.2)x 109/L]、中性粒细胞[(3.2±1.4)x 109/L]无相关性(P＞0.05);BA患儿外周血TC含量[(4.7±1.6)mmol//L]与外周血 T 细胞数量(4 952.1±1 985.0)个/μL 呈正相关(r=0.488,P＜0.05),与外周血B细胞971.0(664.8,1 636.1)个/μL无相关性(P＞0.05);与正常胆固醇BA组相比,高胆固醇BA组线粒体氧化磷酸化相关基因(CYBB、CA1LR、MT-CYB、MT-ND5、MT-ND1)表达显著上调,差异有统计学意义(P＜0.05);在胆固醇刺激下,CD177+中性粒细胞中代表线粒体氧化磷酸化的指标TOMM20及DNA 8-OHdG的平均荧光强度分别为73.47±6.36、159.07±10.17,较刺激前差异有统计学意义(P＜0.05),而CD177+中性粒细胞胞外诱捕网指标MPO和H2B分别为60.51±4.26、157.46±9.40,较刺激前差异有统计学意义(P＜0.05);同时在CD177+中性粒细胞与BEC共培养体系中,加入胆固醇刺激后BEC细胞活率较刺激前差异有统计学意义(P＜0.05).结论 胆道闭锁中胆固醇可上调CD177+中性粒细胞线粒体氧化磷酸化水平,促进胞外诱捕网的释放,引起胆管损伤.

关键词：胆道闭锁、胆固醇、CD177+中性粒细胞、胆管损伤

所属期刊栏目：22

分类号：R741;R563;R392.12

在线出版日期：2023-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：782-789