10.3760/cma.j.cn101785-202303064-016
胆道闭锁中胆固醇活化CD177 +中性粒细胞致胆管损伤的实验研究
目的:通过实验研究胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿总胆固醇(total cholesterol,TC)对胆管损伤的影响,并探讨其免疫学机制。方法:回顾性收集2011—2020年间广州市妇女儿童医疗中心收治的118例经术中胆管造影确诊的BA患儿、80例同龄婴儿肝炎综合征(infantile hepatitis syndrome,IHS)患儿以及165例无肝病学证据且无肝功能异常的同龄正常对照(normal control,NC)儿童外周血TC含量。分析TC与胆管损伤各指标及多种与BA形成相关免疫细胞之间的关联。在体外CD177
+中性粒细胞与胆道上皮细胞(biliary epithelial cell,BEC)共培养体系中加入胆固醇,观察其对BEC凋亡的影响,同时观察加入胆固醇刺激后CD177
+中性粒细胞内相关指标的变化;根据外周血TC检测数值将BA患儿分为高胆固醇BA组、正常胆固醇BA组,通过RNA测序分析,比较高胆固醇组、正常胆固醇组BA患儿CD177
+中性粒细胞基因表达差异。
结果:BA患儿外周血TC含量为4.9(4.0,6.1)mmol/L,高于NC组的3.7(3.1, 4.1)mmol/L及IHS组的4.2 (3.3,5.4)mmol/L,差异有统计学意义(
P<0.05);BA患儿外周血TC含量[4.9(4.0, 6.1)mmol/L]与胆管损伤指标γ-谷氨酰转移酶(gamma-glutamyltransferase,GGT)含量[497.0(298.5,843.0)U/L]呈正相关(
r=0.401,
P<0.05),同时与直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)、总胆汁酸(total bile acid,TBA)含量呈正相关(
r=0.338,
P<0.05;
r=0.235,
P<0.05);在肝脏组织胆管细胞凋亡数量比例层面,高胆固醇BA组为0.724±0.146,正常胆固醇BA组为0.232±0.141,NC组(患儿年龄相近门静脉海棉样变儿童)为0.242±0.228,高胆固醇BA组与其余两组间差异有统计学意义(
P<0.05);BA患儿外周血TC含量[4.4(3.1,5.5)mmol/L]与外周血CD177
+中性粒细胞比例[(26.5±6.4)%]呈正相关(
r=0.503,
P<0.05),与外周血单核细胞[1.0(0.8,1.2)×10
9/L]、中性粒细胞[(3.2±1.4)×10
9/L]无相关性(
P>0.05); BA患儿外周血TC含量[(4.7±1.6)mmol/L]与外周血T细胞数量(4 952.1±1 985.0)个/μL呈正相关(
r=0.488,
P<0.05),与外周血B细胞971.0(664.8,1 636.1)个/μL无相关性(
P>0.05);与正常胆固醇BA组相比,高胆固醇BA组线粒体氧化磷酸化相关基因(
CYBB、
CALR、
MT-
CYB、
MT-
ND5、
MT-
ND1)表达显著上调,差异有统计学意义(
P<0.05);在胆固醇刺激下,CD177
+中性粒细胞中代表线粒体氧化磷酸化的指标TOMM20及DNA 8-OHdG的平均荧光强度分别为73.47±6.36、159.07±10.17,较刺激前差异有统计学意义(
P<0.05),而CD177
+中性粒细胞胞外诱捕网指标MPO和H2B分别为60.51±4.26、157.46±9.40,较刺激前差异有统计学意义(
P<0.05);同时在CD177
+中性粒细胞与BEC共培养体系中,加入胆固醇刺激后BEC细胞活率较刺激前差异有统计学意义(
P<0.05)。
结论:胆道闭锁中胆固醇可上调CD177
+中性粒细胞线粒体氧化磷酸化水平,促进胞外诱捕网的释放,引起胆管损伤。
胆道闭锁、胆固醇、CD177 +中性粒细胞 、胆管损伤
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国家自然科学基金面上项目81974056,82271750;广州市科技计划项目202206080002;National Natural Science Foundation of China81974056 & 82271750;Science and Technology Planning Project of Guangzhou202206080002
2024-01-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共8页
782-789