大鼠去分化脂肪细胞的天花板培养法和滤网培养法比较

摘要：

目的:探讨大鼠去分化脂肪(dedifferentiated fat，DFAT)细胞天花板培养法和滤网培养法的差异，为DFAT细胞的原代培养提供研究基础。方法:从8只4~6周SD(Sprague Dawley)大鼠腹股沟脂肪垫中分离出成熟脂肪细胞，应用天花板培养法和滤网培养法体外去分化培养获得DFAT细胞，比较DFAT细胞形态、生长至首次传代需要的时间和完全培养基量，并通过流式细胞分析和细胞免疫荧光比较DFAT细胞纯度和体外诱导分化为平滑肌细胞的潜能。结果:两种方法培养的DFAT细胞均呈成纤维样、梭形、峰谷样排列。天花板培养法和滤网培养法培养DFAT细胞生长至首次传代需要的时间分别为(16.00±1.41)d和(16.25±0.96)d，差异无统计学意义(
P>0.05)。两种方法培养的DFAT细胞表面抗原表型均为CD29
+CD90
+CD31
－CD45
－，天花板培养法培养的DFAT细胞流式细胞分析结果为CD29
+(97.63±3.15)%、CD90
+(98.63±0.83)%、CD31
+(0.11±0.12)%、CD45
+(0.18±0.11)%；滤网培养法培养的DFAT细胞流式细胞分析结果为CD29
+(96.93±3.61)%、CD90
+(98.65±0.84)%、CD31
+(0.16±0.13)%、CD45
+(0.16±0.10)%，差异均无统计学意义(
P>0.05)。天花板培养法和滤网培养法培养的DFAT细胞在体外经诱导后均可分化为平滑肌细胞，表达α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin，αSMA)和平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain，SMMHC)，αSMA阳性细胞率分别为(73.67±8.04)%、(73.56±8.44)%，差异无统计学意义(
P>0.05)。天花板培养法培养DFAT细胞生长至首次传代较滤网培养法需要更多的完全培养基，分别为93.75(90.00，93.75)mL、48.50(48.50，48.50)mL，差异有统计学意义(
P<0.05)。
结论:天花板培养法和滤网培养法培养DFAT细胞在时间成本、细胞形态、细胞纯度及体外诱导分化为平滑肌细胞的潜能方面均无显著差异，但从经济成本考虑，滤网培养法稍有优势。

关键词：细胞培养技术、去分化脂肪细胞、原代细胞培养、大鼠

所属期刊栏目：22

资助基金：国家自然科学基金81701531;National Natural Science Foundation of China81701531

在线出版日期：2023-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：72-78