无神经节细胞动物模型的建立及鉴定

摘要：

目的 建立一种简单、有效的无神经节细胞大鼠模型,为肠神经干细胞移植治疗先天性巨结肠提供可用的动物模型. 方法 取新生1周龄乳鼠16窝,每窝中随机取4只肛门灌注生理盐水为对照组,4只肛门灌注1％的苯扎氯铵(BAC)作为实验组,灌注后2、4、6、8周观察两组灌注后表现(饮食、活动、腹部及排便等情况)以及直肠形态;HE染色、HuD免疫荧光(IF)染色观察肠神经节形态,并计算各组大鼠肠肌间神经节的数量;qRT-PCR检测胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)以及神经型一氧化氮合酶(nNOS)的表达情况. 结果 灌注后2、4周,两组大鼠无明显异常,6周后实验组出现轻微腹胀,排便减少,至8周时腹胀明显,不排大便,伴精神萎靡,对照组大鼠无异常表现.2周、4周时两组直肠形态无异常,6周时实验组出现轻度狭窄,8周时明显狭窄,对照组未见异常改变.HE染色:术后2、4周两组直肠神经节细胞大小、形状以及数量上无明显异常(P＞0.05),6周时两组神经节细胞数量的中位数分别为3.0和6.0,两组比较差异有统计学意义(z=-5.82,P＜0.001),至8周时实验组未见肌间神经节细胞,对照组无变化.免疫荧光染色:HuD在两组大鼠肠肌间神经节中均有表达,2、4周两组无明显区别;6周时,实验组神经节细胞较对照组体积小、形态异常,至8周时,实验组已无荧光表达,对照组无改变.qRT-PCR:2、4周时两组GDNF mRNA、nNOS mRNA均无明显差异(P＞0.05),6、8周时实验组GDNF mRNA比对照组明显降低(0.06 ±0.03 vs 1.05士0.32;0.39±0.24 vs 1.02±0.22),经统计学分析差异有意义(P＜0.001),8周时GDNF mRNA的表达量较6周时明显升高,经统计学分析差异有意义(P ＜0.001);6、8周时实验组nNOS mRNA比对照明显降低(0.54 ±0.33 vs 1.14±0.50;0.40 ±0.24 vs 1.03±0.26),经统计学分析差异有意义(P＜0.001). 结论 直肠灌注BAC可以导致大鼠直肠神经节细胞完全缺如,GDNF以及nNOS异常表达可能与HD发生有关.

关键词：Hirschsprung病、动物模型、大鼠、苯扎铵化合物

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资助基金：贵州省科学技术基金项目黔科合J字[2012] 2364号;遵义市“15851”人才项目;遵义医学院附属医院硕士科研启动基金院字201101号

在线出版日期：2018-05-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：54-59