LncRNA XIST/FUS/TLR9分子轴在 IgA肾病Th17/CD4+T细胞中的表达及其功能性研究

摘要：

目的 研究lncRNA XIST在IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)Th17细胞中的表达及功能作用,探讨lncRNA XIST对TLR9 mRNA表达的调控作用.方法 (1)外周血单个核细胞(pe-ripheral blood mononuclear cell,PBMC)体外分离出CD4+T细胞并诱导其分化为Th17细胞;(2)利用质粒转染技术使Th17细胞过表达和沉默表达XIST;(3)流式细胞术与CCK-8实验检测XIST不同表达水平Th 17细胞的增殖能力及凋亡情况变化;(4)qRT-PCR法及Western blot法检测XIST、TLR9mRNA及蛋白水平,并通过荧光素酶报告基因分析和TLR9mRNA半衰期检测,推测XIST对TLR9表达的作用;(5)通过Starbase数据库查找潜在与XIST相互作用的RNA结合蛋白,并进行RNA结合蛋白免疫沉淀、Western blot检测;(6)使用GraphPad 8.0进行统计分析,并以(x-)±s表示.组间差异分别采用t检验或单向方差分析.结果 XIST主要分布在Th17细胞胞质中,推测XIST可能参与转录后调控;lncRNA XIST表达下调促进细胞凋亡、DNA损伤,并通过调节Th17细胞中的TLR9抑制细胞增殖;随着lncRNA XIST高表达,TLR9表达增高,XIST通过促进TLR9 mRNA的稳定性来上调TLR9的表达.FUS(fused in sarcoma)是与XIST相互作用的RNA结合蛋白,FUS抗体可以显著富集XIST转录本.下调lncRNA XIST表达对FUS蛋白的表达没有影响,由此推测XIST可能是通过影响FUS的功能而不是表达来发挥作用的.进一步证实,下调XIST显著降低了 FUS与TLR9 mRNA的结合,FUS过表达挽救了 si-XIST诱导的TLR9下调和降解.结论 lncRNA XIST和TLR9通过RNA结合蛋白FUS介导的信号通路对IgAN中Th17的细胞增殖起着至关重要的作用.

关键词：Th17细胞、增殖、长链非编码RNA XIST、RNA结合蛋白、肾小球肾炎、IgA

所属期刊栏目：22

分类号：TS2;R737.9;TS190.6

在线出版日期：2022-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：396-402