微小RNA-130b在嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞损伤中的作用及机制

摘要：

目的 探讨微小RNA-130b(miR-130b)在嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonu-cleoside,PAN)诱导的足细胞损伤中的作用及机制.方法 小鼠肾脏足细胞系MPC5予以PAN 25、50、100μg/mL干预,实时定量PCR检测M PC5细胞系内miR-130b及其宿主基因2610318N02Rik(RIK)表达;转染miR-130b抑制剂(miR-130b inhibitor)或对照(NC inhibitor)后予以PAN 100μg/mL刺激,24 h后采用Western blot检测足细胞裂孔膜蛋白Synaptopodin和Nephrin蛋白表达变化;采用鬼笔环肽染色检测足细胞骨架改变;采用流式细胞技术检测细胞凋亡变化;采用Targetscan 7.2预测miR-130b潜在靶基因,Western blot检测miR-130b模拟物(mimic)对于潜在靶基因PGC1α蛋白表达的影响;采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-130b mimic对于荧光活性的影响.结果 PAN可以抑制足细胞内的miR-130b及宿主基因RIK表达;与转染NC inhibitor组比较,miR-130b inhibitor提高足细胞裂孔膜蛋白synaptopodin和nephrin表达;鬼笔环肽染色显示抑制miR-130b可以部分缓解PAN诱导的足细胞骨架紊乱及重组;流式细胞技术检测结果 示干扰足细胞miR-130b表达可以减少PAN诱导的细胞凋亡;Tar-getcan 7.2分析显示PGC1α是miR-130b的潜在靶基因,Western blot结果 显示,转染miR-130b mimic可以降低足细胞内PGC1α表达;双荧光素酶报告基因系统结果 示,与NC mimic及突变的PGC1α3'-U T R共转染组比较,miR-130b mimic与野生型PGC1α3'-U T R共转染组荧光素酶活性降低.结论 miR-130b通过靶向抑制PGC1α表达参与PAN诱导的足细胞损伤.

关键词：慢性肾脏病、蛋白尿、足细胞、微小RNA-130b、PGC1α

所属期刊栏目：20

资助基金：国家自然科学基金青年项目;江苏省卫生健康委指导性课题;淮安市自然科学研究计划

在线出版日期：2020-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：227-232