哇巴因诱导人足细胞凋亡的作用机制

摘要：

目的 足细胞凋亡在狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)发病过程中有重要作用.内源性哇巴因为强心甾类固醇中的一种,在慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者体内表达上调,在5/6肾切除所模拟的慢性肾衰竭大鼠模型体内可诱导肾间质细胞转分化.本研究主要探讨哇巴因在LN中诱导人足细胞(human podocytecell,HPC)凋亡的作用机制.方法 ①体内实验:选取肾脏肿瘤患者被切除的正常肾组织作为对照组,系统性红斑狼疮疾病活动指数(systemic lupus erythematosusdisease activity index,SLEDAI)评分大于5分的活动性LN患者的肾组织作为研究组,通过免疫组织化学检测肾活检组织中nephrin的表达改变.②体外实验:培养HPC,以不同浓度哇巴因(0 nmol/L,0.1 nmol/L,1 nmol/L,5 nmol/L,10 nmol/L,100 nmol/L)刺激HPC不同时间(24 h、48 h、72 h)后,用MTT法观察并测定哇巴因对HPC增殖凋亡的影响;以不同浓度哇巴因处理HPC 24 h后,采用Hoechst-33258染色检测细胞凋亡;收集各个浓度哇巴因处理的细胞,用蛋白免疫印迹法检测钠钾ATP酶α1(Na+-K+-ATPase α1,NKAα1)、p-Src、nephrin的表达情况.③HPC用Src激酶抑制剂PP2(1 μmol/L)提前1h预处理,随后加入不同浓度哇巴因孵育24 h,收集蛋白,行蛋白免疫印迹,检测p-Src、nephrin的表达.结果 ①哇巴因以剂量和时间依赖方式诱导HPC凋亡.②正常对照肾组织中nephrin的表达沿1肾小球基底膜外侧呈均匀、线状分布,且表达强;LN组肾组织中nephrin在肾小球的分布不均,且表达较正常肾组织明显减弱.③随着哇巴因浓度增加,HPC细胞中NKAα1、p-Src的表达先上调再下降,同时可检测到nephrin蛋白表达逐渐减少.④PP2预处理HPC,阻断哇巴因对Src的活化,使得p-Src表达下调,逆转上述效应,逐渐恢复nephrin的表达,使nephrin表达增加.结论 哇巴因通过NKAM/Src下调nephrin蛋白的表达参与HPC凋亡.

关键词：哇巴因、足细胞、凋亡、狼疮肾炎、钠钾ATP酶

所属期刊栏目：17

分类号：R69;R96

资助基金：国家自然科学基金81400734;湖北省自然科学基金2015CFB241

在线出版日期：2017-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：148-153