自噬在脂质诱导的肾小管上皮细胞损伤中脂质聚集中的作用

摘要：

目的 初步探讨自噬在脂质诱导的肾小管上皮细胞损伤中脂质聚集中的作用.方法 将HK-2细胞培养后,分为4组:0βg/ml组(A组)、20 μg/ml组(B组)、50μg/nnl组(C组)、100 μg/ml组(D组).分别用0 μg/ml、20 μg/ml、50βg/ml、100 μg/ml低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)刺激肾小管上皮细胞24 h,用油红O法检测细胞内中性脂质,通过透射电子显微镜下观察自噬体形成,荧光显微镜下观察LC3-GFP融合蛋白示踪自噬形成,Wester blotting检测LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ蛋白.结果 ①油红O显示在0～100 μg/m1浓度范围内LDL随浓度增高刺激细胞内脂质增多;②电镜显示正常HK-2细胞内可见少许自噬泡,在0～50 μg/ml浓度范围内随LDL刺激浓度增加,细胞内自噬泡逐渐增多,但达到一定浓度(即100 μg/ml)后自噬泡急剧减少;③正常HK-2细胞内可见少许LC3-GFP染色阳性,在0～50 μg/ml浓度范围内随LDL刺激浓度增加,细胞内LC3-GFP染色阳性逐渐增多,但达到一定浓度即100 μg/ml后LC3-GFP染色阳性急剧减少;④正常HK-2细胞内存在少量的LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ,但以LC3-Ⅰ为主,在0～50 μg/ml浓度范围内随LDL刺激浓度增加,LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ均增加,但LC3-Ⅱ增加更明显,50 μg/ml LDL组LC3-Ⅰ是0 μg/ml LDL组的2倍,LC3-Ⅱ表达是0μg/ml的3倍,差异有统计学意义(均P＜0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值逐渐增高,分别为0.41,0.82,1.23,差异有统计学意义(均P＜0.05),但LDL达到100 μg/ml后LC3-Ⅰ和LO-Ⅱ均急剧减少,100 μg/ml LDL组LC3-Ⅰ降至与0μg/ml组LDL相同(P＞0.05),LC3-Ⅱ表达降至为0μg/ml LDL组的1.5倍,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值也急剧下降至0.52,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 肾小管上皮细胞内自噬与脂质有一定关系,自噬可能参与脂质诱导的肾小管上皮细胞内脂质聚集.

关键词：自噬、肾小管上皮细胞、低密度脂蛋白

所属期刊栏目：16

分类号：R28;X52

资助基金：湖北省自然科学基金2013CFB228

在线出版日期：2016-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：562-566