巨大芽孢杆菌细胞色素P450酶的表达纯化及定向进化研究

摘要：

为了获得高效的重组来自巨大芽孢杆菌ALA2的细胞色素P450酶( CYPs),将CYPs基因(cyp)克隆到大肠杆菌表达载体pET20b(含T7启动子)和pTrc99A(含trc启动子)中,转入大肠杆菌表达,发现trc启动子更适合CYPs的表达。优化了Ni-NTA纯化CYPs的条件,在pH值8.1时,用60 mmol/L的咪唑缓冲液洗脱得到电泳纯的重组CYPs,酶活达到2095 U/mg,纯化回收率为31%,回收倍数为2.32。通过理性设计确定突变位点为269位苏氨酸(T)和394位苯丙氨酸(F),通过筛选获得了突变酶T269S和T269R,2种突变酶以软脂酸为底物,酶活提高32.0%和29.0%,以油酸为底物酶活提高11.6%和9.1%。

关键词：巨大芽孢杆菌、细胞色素P450酶、定向进化、软脂酸、油酸

分类号：TQ35;Q556;Q786

资助基金：国家行业公益性重大项目201204801;国家自然科学基金面上项目31270612,31170537;江苏高校优势学科建设工程资助项目

在线出版日期：2015-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：135-140