10.3969/j.issn.1671-4695.2021.20.005
乳腺癌外泌体miR-222-3p靶向CDKN1B诱导肿瘤相关成纤维细胞的形成
目的 探究乳腺癌外泌体miR-222-3p靶向CDKN1B对肿瘤相关成纤维细胞形成的影响及机制.方法 HKF细胞分为MCF7 exo组、MDA-MB-231 exo组、MCF10A exo组和PBS组(HKF细胞分别与10μg/mL的MCF7 exo、MDA-MB-231 exo、MCF10A exo以及等体积的PBS共孵育72 h),miR-NC组、miR-222-3p mimic组和miR-222-3p inhibitor组(HKF细胞分别转染Negative Control、miR-222-3p mimic、miR-222-3p inhibitor),miR-NC exo组和miR-222-3p mimic exo组(HKF细胞分别与10μg/mL的miR-NC exo和miR-222-3p mimic exo共孵育72 h),miR-222-3p mimic exo+CDKN1B组(HKF细胞与miR-222-3p mimic exo共孵育72 h后转染CDKN1B质粒).提取乳腺癌细胞MCF7和MDA-MB-231、乳腺上皮细胞MCF10A所分泌的外泌体(MCF7 exo、MDA-MB-231 exo和MCF10A exo),实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测上述外泌体中miR-222-3p的表达.蛋白质印迹法检测上述各组HKF细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP)-9、MMP-2、MMP-14、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、纤连蛋白(fi-bronectin)、波形纤维蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),双荧光素酶报告基因实验检测miR-222-3p和周期蛋白依赖激酶抑制因子1B(CDKN1B)结合.结果 与PBS组相比,MCF7 exo组、MDA-MB-231 exo组HKF细胞MMP-9、MMP-2、MMP-14、FAP、fibronectin、vimentin、α-SMA表达显著增加,差异均有统计学意义(P<0.001).与miR-NC组细胞相比,miR-222-3p mimic组细胞MMP-9、MMP-2、MMP-14、FAP、fibronectin、vimentin、α-SMA表达显著增加,差异均有统计学意义(P<0.001),miR-222-3p inhibitor组细胞上述标志物表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.001).双荧光素酶报告基因检测结果显示CDKN1B为miR-222-3p的靶基因.MCF7 exo组(4.00±0.31)、MDA-MB-231 exo组(5.94±0.14)中miR-222-3p表达显著高于MCF10A exo组(1.00±0.00),差异有统计学意义(P<0.001).与miR-NC exo组相比,miR-222-3p mimic exo组HKF细胞MMP-9、MMP-2、MMP-14、FAP、fibronectin、vimentin、α-SMA表达显著增加,差异均有统计学意义(P<0.001);与miR-222-3p mimic exo组相比,miR-222-3p mimic exo+CDKN1B组HKF细胞MMP-9、MMP-2、MMP-14、FAP、fibronectin、vimentin、α-SMA表达显著减少,差异均有统计学意义(P<0.001).结论 乳腺癌外泌体miR-222-3p通过抑制CDKN1B表达而促进肿瘤相关成纤维细胞的形成.
乳腺癌;miR-222-3p;肿瘤相关成纤维细胞
20
陕西省重点研发计划项目编号:2020SF-056
2021-11-26(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共5页
2144-2148