肝星状细胞来源外泌体不同提取方法的比较

摘要：

目的 采用超速离心法(UC)和优化后的排阻超滤组合法提取肝星状细胞(HSC)来源外泌体,比较两种提取方法 所得外泌体的纯度、浓度和总蛋白量.方法 分别用UC法和优化后的排阻超滤组合法提取HSC来源外泌体.使用透射电镜观察外泌体形态,纳米颗粒跟踪分析技术(NTA)检测外泌体浓度及大小,二喹啉甲酸(BCA)试剂盒检测外泌体总蛋白浓度,Western blotting法检测外泌体表面标志物肿瘤易感基因101蛋白(TSG101)、分化抗原9(CD9)的表达.结果 两种方法 均可得到圆盘形的30～150 nm膜性囊泡.优化后的排阻超滤组合法所得外泌体,在电镜下可见明显的"茶托"形结构,背景较干净,纯度较高.UC法和优化后的排阻超滤组合法所得外泌体浓度分别为2×109、3.6×1011 particles/ml,平均粒径分别为112.6、121.7 nm.优化后的排阻超滤组合法所得外泌体总蛋白浓度及TSG101的表达高于UC法.结论 优化后的排阻超滤组合法虽然操作繁琐,成本较高,但提取的HSC来源外泌体浓度、总蛋白浓度和纯度较超速离心法高,可以作为外泌体分离的有效方法 .

关键词：肝星状细胞、外泌体、超速离心、排阻超滤组合

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资助基金：国家自然科学基金;中国科学院纳米生物效应与安全性重点实验室开放课题资助项目

在线出版日期：2020-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：703-707