特异性敲除Apelin基因对单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化的影响

摘要：

目的 观察多肽Apelin基因缺失对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化的影响,探讨在梗阻性肾病肾纤维化形成中Apelin的作用和可能机制.方法 利用CRISPR/Cas9技术构建Apelin基因敲除小鼠(KO)共20只,同时选取野生型小鼠(WT)20只,均为8周龄雄性C57BL/6J种系,采用随机数字表法分为:KO+Sham组、KO+UUO组、WT+Sham组、WT+UUO组,每组各10只.分别对小鼠行单侧输尿管结扎(UUO)或假手术(Sham).术后2周将小鼠处死,取血浆和手术侧肾脏进行检测.采用Masson染色观察肾脏纤维化程度,免疫组织化学染色检测肾脏基质成分纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col-I)的分布和表达情况.采用Western blotting法检测肾小管上皮标志物E-钙黏素(E-cadherin)、间充质标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),以及致纤维化细胞因子--转化生长因子-β1(TGF-β1)及其受体TGFβ-R1的蛋白表达量.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血浆肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平.结果 KO+UUO组小鼠肾脏可见明显的肾小管萎缩和肾间质纤维化,基质成分FN和Col-I表达量显著升高.WT+UUO组小鼠肾脏的纤维化程度和基质的表达量均低于KO+UUO组,差异具有统计学意义(P ＜0.05).KO+Sham组和WT+Sham组肾脏无明显的纤维化改变和基质的沉积.KO+UUO组小鼠,可见显著的肾小管上皮-间充质转分化(EMT)表现,E-cadherin减少,α-SMA增多,TGF-β1和TGFβ-R1受体的表达量也明显升高.与KO+UUO组相比,WT+UUO组肾小管上皮E-cadherin的表达较多,α-SMA、TGF-β1和TGFβ-R1受体的表达均较低,差异具有统计学意义(P ＜0.05).而WT+Sham组和KO+Sham组小鼠上述标志物的表达趋于正常水平.KO+UUO组小鼠血浆Cr、BUN的水平最高,WT+UUO组小鼠上述标志物的水平均低于KO+UUO组,差异具有统计学意义(P ＜0.05).KO+Sham组小鼠血浆Cr、BUN与WT+Sham组相比,差异无统计学意义(P ＞0.05).结论 Apelin在正常状态下对肾功能无明显影响,但在输尿管梗阻状态下其基因缺失可能是引起肾间质纤维化加重的因素.

关键词：小鼠、输尿管梗阻、Apelin基因敲除、肾间质纤维化、转化生长因子-β

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资助基金：国家自然科学基金81570660;北京市医院管理局临床医学发展专项经费资助ZYLX201824;首都医科大学科研培育基金自然类课题PYZ2018051

在线出版日期：2020-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：337-341