叶酸缺乏孕鼠子宫内膜基因组甲基化模式改变及对基质细胞蜕膜化的抑制作用研究

摘要：

目的 研究叶酸缺乏孕鼠子宫内膜基因组甲基化模式改变及对基质细胞蜕膜化的抑制作用.方法 取30只性成熟SPF级小鼠,随机分为两组,实验组(15只)小鼠采用无叶酸饲料喂养,对照组(15只)小鼠给予正常饮食,均喂养4周.通过电化学发光法对小鼠血清叶酸含量进行检测,建立小鼠正常妊娠模型和人工诱导蜕膜化模型,检测子宫内膜蜕膜化的情况.通过免疫荧光法对蜕膜化分子标志物Desmin蛋白的表达水平进行检测,并用实时荧光定量PCR法对小鼠dtPRP-mRNA、Bmp2-mRNA的相对表达量进行检测.通过简化代表性亚硫酸氢盐测序法检测小鼠基因组甲基化模式.结果 实验组小鼠血浆叶酸水平较对照组的水平明显下降(P<0.01).实验组小鼠蜕膜鼓包数目少于对照组,直径小于对照组(P<0.05).实验组小鼠人工诱导蜕膜化造模成功率仅为33.33％(3/15),而对照组人工诱导蜕膜化成功率为100.00％(15/15);诱导一侧宫角湿重轻于对照组(P<0.01);经HE染色结果可见实验组小鼠无明显变化,而对照组小鼠诱导侧体积增大,且出现双核或多核的蜕膜细胞.实时荧光定量PCR法检测结果发现,实验组小鼠经人工诱导蜕膜化后,其蜕膜化分子标志物dtPRP-mRNA、Bmp2-mRNA的相对表达量明显低于对照组(P<0.01).体外功能实验结果发现,经激素作用3 d后,实验组小鼠基质细胞仍呈现成纤维细胞样,而对照组小鼠基质细胞形态改变,即由长梭形变为多角形,细胞增大明显.实时荧光定量PCR法检测结果发现,经激素诱导后,实验组小鼠基质细胞中dtPRP-mRNA、Bmp2-mRNA的相对表达量明显低于对照组(P<0.01).经简化代表性亚硫酸氢盐测序法检测结果发现,甲基化胞嘧啶mC多数处在启动子区或CpG岛(CGI)中的CG位点,部分mC处在非CG位点,即mCHG与mCHH(H代表T、C或A).两组小鼠在妊娠第6～7天时不同类型mC分布比较并无显著差异;妊娠第8天时,实验组小鼠mCG在启动子区与CGI中的比率明显高于对照组,而mCHH在启动子区与CGI中的比率低于对照组.结论 叶酸缺乏不仅可阻滞小鼠子宫内膜基质细胞的蜕膜化进程,而且可改变子宫内膜基因组甲基化模式,如各类型的mC分布与平均甲基化水平等,进一步对关键基因的表达及功能造成影响,提示叶酸缺乏可损害小鼠孕早期子宫内膜功能,这可能是叶酸缺乏抑制蜕膜化进程的潜在分子机制.

关键词：小鼠、叶酸缺乏、子宫内膜、基质细胞、基因组、甲基化、蜕膜化

所属期刊栏目：18

资助基金：湖北省自然科学基金项目2015CFB536

在线出版日期：2019-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1133-1137