血清标本检测miR-29a实时荧光定量PCR方法的建立及临床初步应用

摘要：

目的 建立ploy (A)聚合酶加尾的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法检测血清miR-29a,并作临床初步应用.方法 用Trizol试剂提取血清总RNA.miR-29a ploy(A)聚合酶加尾逆转录获得cDNA,进行SYBR Green Ⅰ实时定量PCR扩增检测.制作C.elegans-miR-39模拟物浓度梯度稀释的标准曲线,绝对定量血清中miR-29a的表达水平.结果 该方法能定量检测血清miR-29a表达水平,熔解曲线呈单峰,PCR扩增产物特异,在10Scopies/μl至106 copies/μl范围内有良好的线性关系(r2 =0.991),并且检测重复性好.糖尿病患者血清中miR-29a表达水平明显高于健康体检者(P＜0.05).结论 所建立的ploy(A)聚合酶加尾SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法能敏感、特异地检测血清中miR-29a的表达水平,为下一步临床应用的研究奠定了方法学基础.

关键词：SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR、miR-29a、糖尿病

所属期刊栏目：15

分类号：R75;R18

资助基金：江苏省盐城市医学科技发展计划项目YK20130103

在线出版日期：2016-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：16-19