梅毒螺旋体四种不同膜蛋白在血清学诊断中的应用研究

摘要：

目的：克隆 Tp0821、Tp0319、Tp0971、Tp0663基因，构建原核表达质粒，进行重组蛋白的表达、纯化并用于检测梅毒病人血清抗体。方法从 Tp 库中筛选 Tp0821、Tp0319、Tp0971、Tp0663四种膜蛋白，通过生物信息学软件分析挑选优势抗原表位，与 pQE32载体进行连接分别构建 pQE32/ Tp0821、pQE32/ Tp0319、pQE32/ Tp0971和 pQE32/Tp0663原核表达重组体；进行体外克隆表达与纯化，并分别以单一的 Tp0821、Tp0319、Tp0971、Tp0663及四种重组蛋白嵌合抗原（Tp0821- Tp0319- Tp0971- Tp0663）为包被抗原建立间接 Tp - ELISA 方法，以 TRUST 和 TPPA 法为对照，检测160例 Tp 阴性和83例 Tp 阳性临床标本，评价其在梅毒血清学诊断中应用。结果成功构建原核表达载体 pQE32/Tp0821、pQE32/ Tp0319、pQE32/ Tp0971和 pQE32/ Tp0663；高效表达和纯化出各自相对分子质量的重组蛋白。建立的间接 Tp - ELISA 法检测160例 Tp 阴性和83例 Tp 阳性临床标本，与 TPPA 相比，敏感度分别为85.5％（71/83）、84.3％（70/83）、89.2％（74/83）、81.9％（68/83）及95.2％（79/83），特异度均为100％（160/160），符合率为82.6％~95.7％。单一的 Tp0821、Tp0319、Tp0971和 Tp0663重组蛋白建立的 TP - ELISA 的检出率与 TPPA 法的检出率（100％）比较差异有显著性统计学意义（χ2＝24.5 ~ 31.8，P 均＜0.01），而四种重组蛋白嵌合抗原建立的 TP - ELISA 的检出率与 TPPA 法的检出率比较差异统计学意义（χ2＝7.95，P ＜0.05）。结论制备的 Tp0821、Tp0319、Tp0971、Tp0663重组蛋白具有良好的免疫活性，为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的应用奠定一定的基础，但以四种重组蛋白嵌合抗原建立的间接Tp - ELISA 法进行梅毒螺旋体血清学诊断，能提高其检测敏感度。

关键词：梅毒螺旋体、Tp0821、Tp0319、Tp0971、Tp0663、酶联免疫吸附试验、血清学试验

分类号：R75;R44

资助基金：深圳市宝安区科技局资助项目2013151

在线出版日期：2015-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：457-460