小鼠肝细胞SMAC基因特异干扰载体的构建及慢病毒包装

摘要：

目的：构建并鉴定小鼠SMAC特异干扰载体，并进行慢病毒包装。方法针对小鼠SMAC基因设计并合成3对干扰序列siRNA1、siRNA2、siRNA3及一对阴性对照序列siRNAn，脂质体法转染小鼠肝细胞，Real time PCR法筛选出最佳干扰序列。依据该最佳干扰序列合成DNA oligo，连接GV115载体，获得重组干扰质粒，PCR鉴定阳性克隆并测序鉴定构建的正确性。将该重组干扰质粒与辅助质粒pHelper1．0和pHelper2．0共转染293T细胞，进行慢病毒包装，收集细胞上清并浓缩，梯度稀释法测定病毒滴度。多组间比较采用方差分析，进一步两两比较采用SNK-q检验。结果3条siRNA对肝细胞SMAC mRNA均有不同程度的抑制作用，其中siRNA1的抑制效应最强，抑制效率达到70．3％。依siRNA1片段合成DNA oligo，并与慢病毒载体连接，测序显示其构建正确，梯度稀释法测定慢病毒滴度为6×108 TU/ml。结论成功构建了小鼠SMAC基因特异干扰性的慢病毒，为研究SMAC基因在肝衰竭中的作用奠定基础。

关键词：RNA干扰、SMAC、慢病毒属

分类号：R575(消化系及腹部疾病)

在线出版日期：2014-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：442-445