HBV A83点变异真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达

摘要：

研究A83点突变的生物学意义.采用分子生物学方法,设计引入KpnⅠ和Hind Ⅲ酶切位点的引物扩增乙型肝炎病毒(HBV)ayw亚型的PcP10标准株中的Pre-C/C片段(1 814-2 452),经Kpn Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后,在T4DNA连接酶的作用下连于EB病毒真核表达载体,利用定点突变技术对连接载体进行1 896点的定点诱变.经错配PCR-RFLP和测序分析,确定突变的克隆.提取突变前后的质粒转染HepG2细胞.突变后在Pre-C/C第28位氨基酸形成终止密码,使HBeAg合成终止,转染HepG2细胞后未能检测到HBAg,而未突变的重组质粒则HBeAg表达为强阳性.HBVA83点突变真核表达载体的构建为体外研究该点突变对HBeAg表达的影响以及HBeAg阴性的乙型肝炎病毒感染的致病机理奠定基础.

关键词：定点突变、真核表达载体、转染

所属期刊栏目：18

分类号：R512.6+2(传染病)

在线出版日期：2004-10-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：20-22